抗炭疽保护性抗原PA的细胞表面展示抗体库构建及中和抗体的筛选

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基本信息

项目摘要

通过分选炭疽保护性抗原PA特异性的记忆B淋巴细胞，构建PA特异性的真核细胞表面展示单链抗体库，通过流式细胞术筛选高亲和力的抗PA scFv，并用FACS测定细胞表面展示scFv的亲和力；将较高亲和力的scFv进行可溶性表达，并进一步验证其特异性和亲和力；细胞毒性中和试验（TNA）和大鼠毒素攻击试验在细胞水平及动物体内鉴定不同株scFv对炭疽致死毒素的中和活性；检测已获得的中和抗体与PA不同结构域蛋白的结合情况，确定不同抗体识别的PA结构域；结合Furin酶酶解及七聚体形成抑制试验推断scFv的作用方式。建立抗原特异性真核细胞表面展示抗体库构建及筛选的通用技术体系，为其它病原、肿瘤抗原相关人源抗体的获得提供技术储备；获得的中和活性抗炭疽毒素人源scFv为研制用于预防治疗炭疽的人源全分子抗体奠定了基础。

结项摘要

炭疽芽胞杆菌（Bacillus anthracis）致死率极高，是人畜共患烈性传染病-炭疽病（Anthrax）的病原体。其防生和反恐一直以来都具有重要的军事意义和社会意义。炭疽毒素保护性抗原（protective antigen, PA）的中和性抗体在多种动物模型中表现出良好的治疗效果，是目前最有前景的炭疽治疗药物。其中全人源单克隆抗体应用于人体时具有无免疫原性、半衰期长等优势。该项目通过4年的研究，成功搭建了基于流式分选和单细胞PCR的快速、高通量全人源抗体筛选技术，通过该技术从免疫重组PA疫苗的志愿者体内筛选获得单抗，并对单抗的结构域特异性、亲和力、毒素中和作用机制以及抗体间协同作用等进行研究。我们最终筛选获得34株PA结合单抗，其中4株中和单抗，19株毒素增强单抗。4株中和单抗中，8H6单抗是通过抑制Furin酶切发挥中和效果，4A3加速了PA的降解，22F1中和机制未明确，而仅在体外具有中和活性的单抗2A6能够在毒素增强单抗的帮助下在体内发挥中和作用。本研究中工作为炭疽预防和治疗、相关炭疽病原体研究以及其他全人源单抗的筛选提供帮助和储备。

项目成果

期刊论文数量（8）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
单个B细胞抗体制备技术及应用
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2012
  • 期刊：
    生物工程学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    迟象阳;于长明;陈薇
  • 通讯作者：
    陈薇
人源抗破伤风毒素单链二硫键稳定抗体的重组设计与表达
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2013
  • 期刊：
    细胞与分子免疫学杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    樊红艳;张金龙;房婷;于长明
  • 通讯作者：
    于长明
人破伤风免疫噬菌体单链抗体库的构建及体外亲和筛选
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2013
  • 期刊：
    军事医学
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    张金龙;房婷;于长明;陈薇
  • 通讯作者：
    陈薇
应用噬菌体随机肽库技术筛选鼠疫耶尔森菌F1抗原中和性表位
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2015
  • 期刊：
    生物技术通讯
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    刘炬;杨秀旭;李建民;于长明
  • 通讯作者：
    于长明
抗人前列腺干细胞抗原单克隆抗体的制备及筛选
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2013
  • 期刊：
    军事医学
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    易绍琼;房婷;董磊;于长明
  • 通讯作者：
    于长明

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其他文献

n-型多孔Si/TiO2纳米线异质结构的制备及光电化学性能
  • DOI：
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  • 发表时间：
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  • 期刊：
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  • 作者：
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  • 通讯作者：
    于长明
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  • DOI：
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  • 发表时间：
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  • 期刊：
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  • 作者：
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  • 通讯作者：
    于长明
城市绿色空间可步行性评价方法研究综述
  • DOI：
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  • 发表时间：
    2018
  • 期刊：
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  • 作者：
    于长明;吴培阳
  • 通讯作者：
    吴培阳
用可步行性环境分析法塑造步行友好城市的基本单元——来自北京回龙观住区的案例研究
  • DOI：
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    2020
  • 期刊：
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  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    吴培阳;于长明
  • 通讯作者：
    于长明

其他文献

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于长明的其他基金

无毒炭疽毒素－MAGE3抗原诱导的CTL抗瘤效应
  • 批准号：
    30400545
  • 批准年份：
    2004
  • 资助金额：
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  • 项目类别：
    青年科学基金项目

相似国自然基金

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相似海外基金

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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

        graph TD
          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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