肝癌相关人类癌抗原（HCA）分子CLIMP-63/BGP等参与细胞信号转导以及生物学功能研究

人类癌抗原（Human Carcinoma Antigen,HCA）是一类与肿瘤相关的重要的癌抗原。我们前期工作通过HCA单抗从肝癌细胞以及组织中分离并鉴定出肝癌相关的HCA组分为细胞骨架蛋白（CLIMP-63），糖原磷酸化酶脑型（BGP）等。研究发现CLIMP-63/BGP在某些肿瘤细胞增殖以及肿瘤发生中起重要作用，但在肝癌细胞中表达以及参与细胞信号转导情况尚无文献报道。目前我们已经证实CLIMP-63为HCA的一个组分，并在肝癌组织和细胞中高表达。本研究拟通过干扰CLIMP-63基因以及稳定转染肝癌细胞阐明CLIMP-63参与肿瘤发生和浸润生长有关的信号转导通路情况，并通过免疫共沉淀来验证BGP与CLIMP-63等之间的相互作用，初步评价它们在肝癌中相互作用的生物学功能，为其将来用于诊断和靶向治疗奠定基础。

目的：CKAP4，又称P63, 分子量63KD,是一种II型转膜蛋白，早期研究表明CKAP4对维持内质网结构具有重要的作用。最近发现CKAP4与肿瘤的进展有关。本研究的目的一方面研究CKAP4在肝癌中的表达情况并结合临床资料探讨其表达与肝癌发生发展的关系；另一方面研究CKAP4在肝癌中的生物学作用及机制；.方法：在286例HCC组织中运用real-time PCR、western blot以及IHC等方法检测肝癌、癌旁及正常肝组织中CKAP4的表达情况；并结合临床资料统计分析CKAP4与相关临床指标及预后之间的关系；采用Kaplan-Meier方法，对病例随访五年进行生存分析，COX回归分析用于探索CKAP4表达与临床病例变量在生存中的影响。以及采用CCK-8等检测CKAP4高低表达对多种细胞系增殖的影响；然后通过ELISA检测大鼠DEN诱癌过程中血清中CKAP4的动态变化，及比较正常、肝炎、肝硬化及肝癌病人血清中CKAP4的表达；.结果：基因转录水平和蛋白表达水平显示CKAP4在肝癌组织中表达明显高于癌旁组织和正常组织；卡方检验显示CKAP4表达和肿瘤大小(p=0.001)、肝内转移(p=0.005)、门静脉侵犯(p=0.007)、BCLC分期(p=0.037)成负相关；CKAP4表达和生存时间和无瘤生存时间呈正相关并具有统计学意义。多因素分析提示CKAP4是OS的风险因素，CKAP4高表达的HCC细胞增殖能力降低以及侵犯潜力降低，其机制可能通过抑制Wnt信号通路和EMT的发生发挥其生物学作用。而且，我们证实CKAP4表达在小鼠模型中抑制肿瘤的生长。ELISA结果提示CKAP4在肝癌血清中浓度高于正常。 .结论：CKAP4在HCC中表达上调，其表达水平与HCC患者的预后相关，过表达的CKAP4体外及体内均能抑制HCC细胞的增殖及侵犯。因此我们推测CKAP4与HCC的进展及转移相关，可作为HCC患者的一个新的预后及血清诊断标志物。

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