猪瘟野毒株与兔化弱毒疫苗株的多重环介导等温扩增-核酸免疫试纸鉴别检测

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项目介绍
AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    31172331
  • 项目类别：
    面上项目
  • 资助金额：
    66.0万
  • 负责人：
    王爱萍
  • 依托单位：
    郑州大学
  • 学科分类：
    C1802.兽医病毒学
  • 结题年份：
    2015
  • 批准年份：
    2011
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2012-01-01 至2015-12-31

项目摘要

针对猪瘟病毒(CSFV)野毒感染与疫苗免疫鉴别诊断的关键问题，在分析CSFV全基因组序列的基础上，设计筛选CSFV野毒和疫苗株的特异性环介导等温扩增(LAMP)引物，以生物素(biotin)、荧光素(FITC)/地高辛(DIG)标记环引物(LF/LB)，分别建立CSFV野毒和疫苗株RT-LAMP检测方法；利用亲和素(avidin)和抗FITC和DIG单克隆抗体建立CSFV的RT-LAMP-核酸免疫试纸检测方法；通过筛选CSFV野毒株和疫苗株的最佳LAMP引物配对，系统优化RT-LAMP反应体系和反应条件，建立CSFV野毒株和疫苗株的多重RT-LAMP扩增方法，并研制检测LAMP扩增产物的多联核酸免疫试纸，建立CSFV野毒株与兔化弱毒疫苗株的多重RT-LAMP-核酸免疫试纸鉴别检测方法，为我国猪瘟防控与净化提供技术支撑，对动物疫病多重感染的鉴别检测有重要意义。

结项摘要

本项目研究发现了环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)的缺陷，并提出了合理有效的改进措施；系统分析了猪瘟病毒(classical swine fever virus, CSFV)全基因组序列，采用PrimerExplorer 4 和 Oligo 7软件设计筛选了CSFV野毒和疫苗株的特异性LAMP引物，以生物素（Biotin）、荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)标记LAMP引物，分别建立了CSFV野毒和疫苗株RT-LAMP-核酸免疫试纸检测方法；筛选确定了CSFV野毒和疫苗株的最佳LAMP引物配对，优化了RT-LAMP反应体系和反应条件，建立了CSFV野毒株和疫苗株的多重RT-LAMP扩增方法，并研制了检测LAMP扩增产物的多联核酸免疫试纸，建立了CSFV野毒株和疫苗株的多重RT-LAMP-核酸免疫试纸鉴别检测方法。该项目研究成果为我国CSFV野毒株和疫苗株鉴别诊断提供了技术支撑，对动物疫病多重感染的鉴别检测有重要意义。

项目成果

期刊论文数量（12）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
A sensitive and rapid detection of Escherichia coli O157 in raw milk byloop-mediated isothermal amplification combined with 4-(2-pyridylazo) resorcinol monosodium salt
环路介导等温扩增联合 4-(2-吡啶基)间苯二酚单钠盐灵敏快速检测原料奶中大肠杆菌 O157
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2014
  • 期刊：
    Transactions on Biomedicine and Health
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    王德国;王永真;肖付刚;王爱萍
  • 通讯作者：
    王爱萍
Novel primers for increased specificity and sensitivity for the detection of Staphylococcus aureus by real-time LAMP
新型引物可提高实时 LAMP 检测金黄色葡萄球菌的特异性和灵敏度
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2015
  • 期刊：
    CyTA - Journal of Food
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    王德国
  • 通讯作者：
    王德国
环介导等温扩增技术的引物设计与筛选研究
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2014
  • 期刊：
    安徽农业科学
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    王德国;王永真;王爱萍
  • 通讯作者：
    王爱萍
Development and Evaluation of a Loop-Mediated Isothermal Amplification (LAMP) Method forDetecting Foodborn Salmonella in Raw Milk
用于检测生牛奶中食源性沙门氏菌的环介导等温扩增 (LAMP) 方法的开发和评估
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2013
  • 期刊：
    Advanced Materials Research
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    王德国;王永真
  • 通讯作者：
    王永真
Two Methods for Increased Specificity and Sensitivity in Loop-Mediated Isothermal Amplification
提高环介导等温扩增特异性和灵敏度的两种方法
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2015
  • 期刊：
    Molecules
  • 影响因子：
    4.6
  • 作者：
    王德国;Jeffrey D. Brewster;Moushumi Paul;Peggy M. Tomasula
  • 通讯作者：
    Peggy M. Tomasula

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  • 通讯作者：
    王爱萍

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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

        graph TD
          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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