牛源犬新孢子虫NcSRS2-NcGRA7复合基因核酸疫苗与重组腺病毒疫苗的免疫保护作用及其机制研究
项目介绍
AI项目解读
基本信息
- 批准号:31160501
- 项目类别:地区科学基金项目
- 资助金额:52.0万
- 负责人:
- 依托单位:
- 学科分类:C1805.兽医寄生虫学
- 结题年份:2015
- 批准年份:2011
- 项目状态:已结题
- 起止时间:2012-01-01 至2015-12-31
- 项目参与者:张守发; 蔡锦顺; 于龙政; 薛书江; 高建伟; 焦石; 钱年超; 刘明明;
- 关键词:
项目摘要
新孢子虫病是危害养牛业生产的重要寄生虫病,目前对该病的防控尚无有效方法。本研究以牛源犬新孢子虫吉林株为试验材料,SOE-PCR拼接NcSRS2和NcGRA7基因,构建NcSRS2-NcGRA7复合基因核酸疫苗和重组腺病毒疫苗;应用prime-boost免疫策略和单疫苗分别肌注接种BABL/c小鼠,ABC-ELISA检测IgG1、IgG2a及IgE等水平,流式细胞术检测CD4+、CD8+ T淋巴细胞亚群变化,ELISA检测IFN-γ、IL-4等细胞因子水平及血清NO浓度,评价免疫应答水平;对三免后BABL/c小鼠腹腔攻击犬新孢子虫速殖子,观察临床症状并统计存活率,Real-time PCR检测脑组织、脏器等虫体DNA含量,病理学检查脑组织、脏器及生殖器官变化,并检测其生殖机能,评价各组疫苗的免疫保护性,进而阐明免疫保护作用机制。以期为新孢子虫病新型疫苗的研究及该病的防制奠定基础。
结项摘要
新孢子虫病是危害养牛业生产的重要寄生虫病,为阐明牛源犬新孢子虫NcSRS2-NcGRA7复合基因核酸疫苗与重组腺病毒疫苗的免疫保护作用机制,项目组圆满完成了6项计划研究内容,并进行了拓展研究。本项目应用SOE-PCR技术获得大小为1482 bp的NcSRS2-NcGRA7复合基因;制备了牛源犬新孢子虫NcSRS2-NcGRA7重组蛋白多克隆抗体和pVAX1-NcSRS2-NcGRA7核酸疫苗;构建了pCR259-NcSRS2-NcGRA7重组腺病毒穿梭质粒和重组腺病毒表达质粒,制备了滴度为10^9 TCID50/mL的Ad5-NcSRS2-NcGRA7重组腺病毒疫苗;应用核酸疫苗和重组腺病毒疫苗建立了Prime-Boost免疫策略,经对Prime-Boost和单疫苗接种小鼠的抗体水平、T淋巴细胞亚群变化及细胞因子水平等指标的检测分析,证实Prime-Boost诱导小鼠的免疫应答水平显著优于重组腺病毒疫苗和核酸疫苗;经对攻虫小鼠的临床症状观察,主要脏器组织虫体含量、病理学变化及其生殖机能等各项指标的检测表明,Prime-Boost和Ad5-NcSRS2-NcGRA7免疫保护率最高,pVAX1-NcSRS2-NcGRA7次之;证实Prime-Boost和Ad5-NcSRS2-NcGRA7在提高机体免疫水平的同时,有效抑制了虫体对脏器组织细胞的侵袭,尤其Prime-Boost免疫保护作用优势显著。同时,本项目构建了牛源犬新孢子虫NcSRS2、NcSAG1基因重组腺病毒疫苗,制备了NcMAG1-IFN-γ融合基因核酸疫苗和NcAMA1重组蛋白亚单位疫苗;成功从流产胎牛脑组织中分离出牛源犬新孢子虫延边株;建立了犬新孢子虫Nc-GFP株BALB/c小鼠动物模型和犬新孢子虫三种靶基因PCR检测方法;对牛源犬新孢子虫NcSRS2、NcAMA1、NcSRS9、NcGRA7等基因进行了克隆和表达;构建了犬新孢子虫NcAMA1基因重组腺病毒穿梭质粒和重组猫疱疹病毒I型转移质粒,并进行了真核表达。本项目为新孢子虫病新型疫苗的临床应用及该病的防控研究奠定了基础。
项目成果
期刊论文数量(26)
专著数量(0)
科研奖励数量(5)
会议论文数量(9)
专利数量(0)
Isolation, Identification, and Pathogenicity of Neospora caninum China Yanbian strain
犬新孢子虫中国延边株的分离、鉴定及致病性
- DOI:--
- 发表时间:--
- 期刊:Iranian J Parasitol,
- 影响因子:--
- 作者:Shou-fa ZHANG;Ming-ming LIU;Nian-cha QIAN;Huan-ping GUO
- 通讯作者:Huan-ping GUO
牛源犬新孢子虫NcSRS2-NcGRA7融合基因的克隆与生物信息学分析
- DOI:--
- 发表时间:2013
- 期刊:畜牧与兽医
- 影响因子:--
- 作者:贾立军;张守发;谷振甲
- 通讯作者:谷振甲
新孢子虫与弓形虫交叉抗原基因AMA1的克隆及原核表达载体构建
- DOI:--
- 发表时间:2015
- 期刊:延边大学农学学报
- 影响因子:--
- 作者:孙婷婷;金京顺;贾立军
- 通讯作者:贾立军
吉林省白山地区牛新孢子虫病流行病学调查
- DOI:--
- 发表时间:2015
- 期刊:畜牧与兽医
- 影响因子:--
- 作者:张守发;李积旭;张蕾;贾立军
- 通讯作者:贾立军
牛新孢子虫NcSRS2基因腺病毒穿梭载体的构建及在293细胞中的表达
- DOI:--
- 发表时间:2012
- 期刊:中国兽医学报
- 影响因子:--
- 作者:贾立军;张守发;刘明明
- 通讯作者:刘明明
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其他文献
犬新孢子虫AMA1基因重组猫疱疹病毒1型转移载体的构建及真核表达
- DOI:--
- 发表时间:2014
- 期刊:中国兽医科学
- 影响因子:--
- 作者:郭焕平;张守发;高洋;贾洪林;贾立军
- 通讯作者:贾立军
应用间接ELISA方法检测猪附红细
- DOI:--
- 发表时间:--
- 期刊:中国兽医杂志,2007年,第43卷,第12期,17-18.
- 影响因子:--
- 作者:贾立军;张守发;柴方红
- 通讯作者:柴方红
羊附红细胞体抗原的提取及免疫性
- DOI:--
- 发表时间:--
- 期刊:黑龙江畜牧兽医,2007年,第8期,84-85.
- 影响因子:--
- 作者:贾立军;张守发*;齐楷;丁德
- 通讯作者:丁德
吉林省牛新孢子虫病流行病学调查
- DOI:--
- 发表时间:2017
- 期刊:中国兽医杂志
- 影响因子:--
- 作者:张贺洋;刘晋宇;凌芳芳;兰岚;姜利建;贾立军
- 通讯作者:贾立军
牛源犬新孢子虫酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定
- DOI:--
- 发表时间:2016
- 期刊:畜牧与兽医
- 影响因子:--
- 作者:李积旭;张守发;李男礼;海旭南;贾立军
- 通讯作者:贾立军
其他文献
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