乙肝病毒与弥漫性大B细胞淋巴瘤因果关联的生物学证据及其作用机制

The incidence rate of non-Hodgkin lymphoma (NHL) has an obvious increase tendency recent years, but its causation is not clear. The epidemiologic investigations suggested it existed an obvious association between hepatitis B virus (HBV) chronic infection and diffuse large B cell lymphoma (DLBCL) of NHL subtype, but the biological evidence is lack. Based on previous studies, this project put forward a causal association between hepatitis B virus and DLBCL, which not only possess epidemiologic evidence, but also have new ideas for finding biologic evidence and its molecular mechanism. We will find out the existence of HBV gene in DLBCL cell by PCR and in-situ hybridization; find out the co-existence and location of HBV infection marker (HBsAg) and tumor specific marker (CD20) in cancer cells by immunofluorenscence method; find out HBV gene expression and integration status in DLBCL by molecular biological technique; analyze biologic characteristics and the molecule changes of cellular signal transduction pathway by gene transfection and expression methods. The main purpose is to analyze the causal association between HBV and DLBCL from biologic plausibility, and to explore the mechanism of HBV action. This study will add new idea and new data for clearing of NHL occurrence and molecular mechanism in theory, and provide new experimental evidence and measures for NHL prevention and treatment.

非霍奇金淋巴瘤（NHL）发病率近年来呈明显上升趋势，但其病因不明。流行病学调查提示NHL的亚型弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）的发生与乙肝病毒（HBV）慢性感染明显相关，但生物学证据不足。本课题在既往研究的基础上提出两者之间的因果关联，不但具有流行病学证据，还具有探寻生物学证据及其分子机制的新设想。本研究将采用PCR和原位杂交技术查明瘤细胞中HBV基因组的存在；采用免疫荧光共聚焦技术查明肿瘤特异性标志物（CD20）和HBV感染标志物（HBsAg）在瘤细胞中的共存在和定位；运用HBV-Alu-PCR技术查明HBV基因在瘤细胞染色体中的整合特征；运用基因转染技术分析致瘤相关的信号转导通路分子在病毒整合前后的变化。旨在结合体内和体外实验结果，从生物学合理性角度分析HBV与DLBCL的因果关联性，为揭示NHL病因和阐明其发病的分子机制增添新思路新资料，并为NHL的防治提供新的实验依据和措施。

项目背景：非霍奇金淋巴瘤（NHL）发病率近年来呈明显上升趋势，但其病因不明。流行病学调查提示NHL的亚型弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）的发生与乙肝病毒（HBV）慢性感染明显相关，但生物学证据不足。本课题在既往研究的基础上提出两者之间的因果关联，不但具有流行病学证据，还具有探寻生物学证据及其分子机制的新设想。.主要研究内容：本研究将采用PCR和原位杂交技术查明瘤细胞中HBV基因组的存在；采用免疫荧光共聚焦技术查明肿瘤特异性标志物（CD20）和HBV感染标志物（HBsAg）在瘤细胞中的共存在和定位；运用HBV-Alu-PCR技术查明HBV基因在瘤细胞染色体中的整合特征；运用基因转染技术分析致瘤相关的信号转导通路分子在病毒整合前后的变化。在结合体内和体外实验结果，从生物学合理性角度分析HBV与DLBCL的因果关联性，.重要结果、关键数据及其重要意义：本研究共收集了1420例NHL 患者病例资料，其中861例DLBCL患者血液、病理或骨髓标本资料。DLBCL患者中HBsAg阳性者有109例（12.66%），健康体检人群3640例中有174例（4.78%），两组间存在明显差异（χ2= 12.78，P<0.01）。DLBCL患者与对照组间抗-HBc阳性率为54.32%，对照组阳性率为 37.42%，两组间存在明显差异（χ2=20.33，P<0.01），OR值为1.76（95%CI：1.40-2.32）。DLBCL、其它类型NHL及DLBCL合并HBsAg阳性患者原发部位均为淋巴结最常见。对DLBCL淋巴结、扁桃体、脾脏和胃肠道组织等的免疫组织化学检测可见HBsAg和HBcAg阳性信号，但分子生物学试验未发现HBV DNA基因及其整合现象。结果提示HBV可能是DLBCL发病的重要危险因素之一，但是其发生的具体分子机制尚需进一步深入研究。本研究为揭示NHL病因增添新思路新资料，并为NHL的防治提供新旨的实验依据。

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