肝癌抑癌候选新基因HSPC238相互作用蛋白的筛选与鉴定

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项目介绍
AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    81101534
  • 项目类别：
    青年科学基金项目
  • 资助金额：
    22.0万
  • 负责人：
    黄湘
  • 依托单位：
    南方医科大学
  • 学科分类：
    H1802.肿瘤发生
  • 结题年份：
    2014
  • 批准年份：
    2011
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2012-01-01 至2014-12-31

项目摘要

HSPC238是一个新的含RING指的C3HC4型锌指蛋白。2008年3月Brophy TM等首先报道其具有E3酶活性，随后再未检索到有关其功能研究的报道。锌指蛋白是一类重要的转录调控因子，研究提示含RING指的锌指蛋白不仅具有E3酶活性，还可参与基因转录调控及肿瘤抑制等多种生物学过程。特别是若将其研究结果应用于人工转录因子的构建，将为药物开发和基因治疗提供新思路。为此，含RING指的有E3酶活性的HSPC238蛋白引起了我们的关注。我们的前期实验已证实该基因在体内外均能明显抑制肝癌细胞的增殖和侵袭；采用2D结合MALDI-TOF/TOF技术也发现其能在SMMC7721细胞中明显下调多个致癌蛋白。为进一步明确该蛋白的功能，本课题拟采用酵母双杂交、RNA干扰、pull down及免疫共沉淀等方法筛选并鉴定其相互作用蛋白、探讨它的作用网络，为达到从锌指途径寻找肿瘤治疗新靶点的最终目标奠定基础。

结项摘要

2008 年3 月Brophy 等首先报道HSPC238具有E3 酶活性，随后再未检索到有关其功能研究的报道。我们的前期实验已证实该基因在体内外均能明显抑制肝癌细胞的增殖和侵袭；采用二维MALDI-TOF/TOF 技术也发现其能在SMMC7721 细胞中明显下调多个致癌蛋白。为进一步明确该蛋白的功能，本课题在项目基金的资助下，完成了以下系列实验：.（1）筛选：采用酵母双杂交技术初步筛选到与HSPC238可能相互作用的一组蛋白，经查阅文献，初步锁定四种蛋白质（HMOX-1、MT2A、RPS27a、Ubb，以下简称目标蛋白）作为下一步研究的对象；.（2）验证：激光共聚焦实验结果显示，目标蛋白与HSPC238蛋白共定位于细胞浆，证明二者存在空间相遇。再通过pull down及免疫共沉淀技术进一步证实HSPC238与目标蛋白在体内外均存在相互作用；.（3）影响和调节：前期通过动物实验证实，转染HSPC238可明显促进小鼠体内实体瘤的生长。本课题通过在HEPG2细胞内过表达（及干扰）HSPC238后，分别采用RT-PCR和WB法检测目标基因和蛋白的表达水平。结果表明外源性干扰HSPC238后，MT2A等目标蛋白/基因的表达明显下调；外源性过表达HSPC238后，MT2A等目标蛋白/基因表达水平也随之上调。.（4）调节途径：分别转染pcDNA3.1-目标蛋白于稳定高表达（或低表达）HSPC238细胞株，镍柱纯化目标蛋白，以HSPC238做免疫印迹，对照组以MG132(10uM)处理细胞，较未处理细胞组条带增加，这表明泛素化的目标蛋白在MG132抑制蛋白酶体活性后大量累积。实验结果表明，目标蛋白通过泛素蛋白酶体途径（UPP）进行代谢，HSPC238可能通过UPP对目标蛋白进行调节； .（5）调节机制：把目标蛋白过表达载体分别与低（或高）表达HSPC238的细胞转染，检测细胞增殖与侵袭能力，结果表明，过表达目标蛋白后，细胞增殖能力及侵袭能力均相对增强。这说明HSPC238是通过对目标蛋白的调节来影响肝癌细胞的生长的，但其具体调节机制，仍有待后续进一步研究探讨。. 通过本项目的研究，已在国内核心期刊发表相关学术论文4篇，另有5篇在投，申请国家发明专利一项，获得市科技进步二等奖一项，取得了预期成果。

项目成果

期刊论文数量（5）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
PSMA7 inhibits the tumorigenicity of A549 human lung adenocarcinoma cells
PSMA7抑制人肺腺癌细胞A549的致瘤性
  • DOI：
    10.1007/s11010-012-1290-2
  • 发表时间：
    2012-07-01
  • 期刊：
    MOLECULAR AND CELLULAR BIOCHEMISTRY
  • 影响因子：
    4.3
  • 作者：
    Tan, Jia-Yu;Huang, Xiang;Luo, Ya-Ling
  • 通讯作者：
    Luo, Ya-Ling
靶向抑制UBE2C基因对SMMC-7721细胞生物学行为的影响
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2013
  • 期刊：
    免疫学杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    黄湘;谭家余;李冬秀
  • 通讯作者：
    李冬秀
pCDNA3.1-MT2A 真核表达载体的构建及亚细胞定位
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2014
  • 期刊：
    中国免疫学杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    谭家余;陈敬林;黄湘
  • 通讯作者：
    黄湘
人蛋白酶体α7亚基在原发性肝细胞肝癌中的表达及临床意义
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2012
  • 期刊：
    细胞与分子免疫学杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    黄湘;邹浩元;杨宇辉;谭家余;邱玉林
  • 通讯作者：
    邱玉林
PSMA7 对A549 细胞表面黏附分子表达的影响
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2014
  • 期刊：
    免疫学杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    黄湘;王莹;袁春雷;谭家余
  • 通讯作者：
    谭家余

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  • 通讯作者：
    2Graduate University of Chinese Academy of Sci

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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

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          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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