突变型p53介导的lncRNA H19对miR-21在肺癌发生发展中的调控机制

Non-coding RNA play an important role in the development of lung cancer. In our previous research, through gene screen and TCGA database, we picked lncRNAH19 and we found that the expression of miR-21 varied by the expression of H19, which showed the correlation in some extent. By associating the regulatory mechanism model between LncRNA and microRNA, we speculate that mutant p53 may play an important role in linking H19 with miR-21 on the mutual interaction in lung cancer. Through the methods of qRt-PCR，plasmid transfection， luciferase reporter gene, RNA-pulldown, RIP , RNA interfering and so on, we explore that how H19 regulate mutant p53 and how mutant p53 regulate miR-21 differently in order to know the regulatory mechanism between H19 and miR-21, which may provide a new idea for therapy.

非编码RNA的协同调控在肺癌的发生发展中发挥重要作用，但具体调控机制尚不清楚。我们通过前期的芯片筛查以及生物信息学方法印证比对筛选出与肺癌调控和预后密切相关的lncRNAH19，并通过前期研究等发现miR-21在肺癌中的表达与H19呈正相关，且突变型p53分别与H19和miR-21可能存在密切的关联及作用。据此，我们提出假说：突变型p53介导了H19对miR-21在肺癌发生发展中的调控作用。本课题拟从组织、细胞以及动物模型水平等多层次开展研究，结合LncRNA与microRNA调控机制的相关模型，通过实时定量PCR、质粒转染、RNA-pulldown 和RIP、RNA干扰等技术，探索研究突变型p53分别与H19和miR-21的相互作用，希望阐明H19与miR-21在肺癌中的具体调控机制。本研究将从突变型p53的纽带作用这个新视点探讨H19对miR-21的作用，为肺癌治疗提供新思路。

肺癌已成为全世界范围内因肿瘤导致死亡的首要原因，而肺癌的发生发展机制并不明确，国内外研究报道这与非编码RNA调控失常有关。非编码RNA是指一系列不编码蛋白质的RNA，主要包括lncRNA, microRNA, tRNA, snRNA等。单一的非编码RNA调控并不能起到关键作用，几种非编码RNA协同调控才是调控肺癌发生发展的驱动因素。非编码RNA之间的相互作用机制一直是非编码RNA研究的热点和难点。我们前期应用lncRNA芯片和生物信息学技术筛选出了lncRNA H19并且发现H19与miR-21有正相关的调控关系，但是具体的机制尚不清楚。因此我们通过RNA结合蛋白的筛选发现了突变型P53蛋白是联系H19和miR-21的重要纽带。我们分别研究了H19-mtp53和mtp53-miR-21各自的调控关系。研究发现，H19可以与突变型p53蛋白结合；H19过表达可诱导突变型p53表达升高，并与mtp53相互作用，延长半衰期，增强转录活性，导致肺癌进展。同时抑制H19和p53可能为临床有效控制肺癌提供一种新的策略。进一步我们发现，miR-21和p53在肺癌中表达增加，并且这些增加与肺癌患者的临床病理数据和生存有关。我们还确认了肺癌中p53突变的两个重要位点：R175H和R248Q。重要的是，根据我们的研究，miR-21可能不像之前所认为的那样具有致癌作用，在肺癌中发挥致癌作用可能仅仅是因为p53发生了突变，从而导致miR-21表达升高从而调控下游靶基因。因此，H19-mtp53-miR-21作为一个整体模块协同调控肺癌的发生发展，这将为后续确定肿瘤分子标志物和肺癌治疗新靶点提供依据。

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