lncRNA RP11-764K9.1/miR-532-5p ceRNA网络介导的脂滴动态调控在宫颈癌淋巴管生成重塑中的作用机制

Lymphangiogenesis and lymphatic vessel remodeling, as a key step of lymph node metastasis, are primary causes of cervical cancer death. Our previous work confirmed that lipid metabolism remodeling can promote cervical cancer metastasis. However, as the main organelle of lipid storage, the mechanism of lipid droplets dynamics in regulating lymphangiogenesis and lymphatic vessel remodeling is unknown. In our preliminary experiments, we observed that there were competitive binding sites in lncRNA RP11-764K9.1/miR-532-5p/FASN. MiR-532-5p overexpression could induce lipid droplets dynamic changes and significantly reduce lymphatic endothelial cell proliferation and tube formation. Thus we assume that the lipid droplet dynamics mediated by lncRNA RP11-764K9.1/miR-532-5p ceRNA network can induce lymphangiogenesis and remodeling to promote lymph node metastasis of cervical cancer. Therefore, this project intends to further clarify the mechanism of ceRNA regulatory network in activating the EMT of cervical cancer cells and inducing lymphatic remodeling by regulating the lipid droplet dynamics. This project might reveal certain new mechanisms of lymph node metastasis from the perspective of lipid droplet dynamics mediated by ceRNA, and provide novel targets and strategies for achieving individualized precision treatment of cervical cancer, thus improving the overall prognosis of the disease.

淋巴管生成重塑作为淋巴结转移的关键步骤，是宫颈癌致死的主要原因之一。我们前期工作证实脂质代谢重塑可促进宫颈癌转移。然而，脂滴作为脂质储存的主要细胞器，其在调控淋巴管生成重塑中的机制尚未可知。预实验发现lncRNA RP11-764K9.1/miR-532-5p/FASN存在竞争性结合位点，过表达miR-532-5p可引发脂滴动态变化，使得淋巴管内皮细胞增殖及成管能力显著下降。由此我们推测：lncRNA RP11-764K9.1/miR-532-5p ceRNA网络介导的脂滴动态调控可促进淋巴管生成重塑，导致宫颈癌淋巴结转移。因此，本项目拟进一步阐明ceRNA调控网络通过介导脂滴动态变化，激活宫颈癌细胞EMT并诱导淋巴管生成重塑，促进宫颈癌发生淋巴结转移的机制。本研究从ceRNA网络介导脂滴动态变化的角度，揭示淋巴结转移的新机制，为宫颈癌患者的个体化精准治疗和预后改善提供潜在新靶标和新视角。

研究背景: 淋巴结转移是导致宫颈癌患者预后较差的主要原因之一。我们前期工作证实非编码RNA调控的脂质代谢重塑可促进宫颈癌转移。然而，脂滴作为细胞内脂质储存的主要细胞器，其在调控淋巴结转移中的机制尚未可知。.研究内容: 基于TCGA公共数据库，运用LASSO-COX回归模型构建可用于有效评估宫颈癌患者预后的miRNA风险模型。通过Transwell、淋巴管形成实验以及脂滴、甘油三酯、磷脂含量检测等功能实验探究miR-532-5p介导宫颈癌细胞脂滴异常富集调控淋巴结转移的生物学作用；借助基因定点突变、双荧光素酶报告基因实验、RNA结合蛋白免疫共沉淀及挽救实验明确miR-532-5p/LINC01410/FASN构建的ceRNA网络调控淋巴结转移的分子机制。通过爪垫注射的方法构建宫颈癌淋巴结转移裸鼠模型，评价miR-532-5p联用FASN抑制剂奥利司他（Orlistat）对肿瘤生长及淋巴结转移的影响。.重要结果及数据: 我们成功构建了一个新型的，由miR-532-5p、miR-532-3p、miR-378a-5p、miR-502-3p、miR-361-3p组成的宫颈癌miRNA预后风险模型。其中miR-532-5p在淋巴结转移阳性的宫颈癌原位组织中显著低表达（P<0.01），是影响宫颈癌患者预后的独立危险因素。过表达miR-532-5p可显著抑制宫颈癌细胞的增殖能力、侵袭迁移能力、淋巴管内皮细胞的成管能力及上皮间质转化；同时可使得细胞内脂滴、甘油三酯、磷脂含量明显下降，并引起脂肪酸代谢关键酶的表达异常（下调FASN、ACC1、PLIN2，上调ACOX1、CPT1A）。我们进一步机制研究发现LINC01410可作为ceRNA靶向竞争性结合miR-532-5p来调控其靶基因FASN的表达，进而引发细胞内脂滴富集异常，促进淋巴结转移的发生。过表达肿瘤细胞内miR-532-5p并同时用Orlistat处理裸鼠，可显著抑制裸鼠皮下瘤灶的生长。裸鼠淋巴结转移模型实验证实miR-532-5联用Orlistat相较单独处理组，可显著降低淋巴结转移发生率。.科学意义: 为miR-532-5p联用FASN抑制剂-Orlistat作为治疗宫颈癌淋巴结转移的新策略提供了实验基础与临床转化依据。

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