中草药杀灭鱼类单殖吸虫活性分子的分离及杀虫机理研究

中草药活性分子及药理基础研究是创制水产新药的理论基础，是提高水产病害控制效果、保障水产品和环境安全的重要途径之一。本申请以中草药小果博落回、盾叶薯蓣为研究对象，以危害鱼类严重地单殖吸虫-指环虫为供试虫，采用模型寄生虫-中型指环虫活体感染金鱼、药浴杀虫和鳃组织离体培养指环虫的药物杀虫活性测定方法，结合硅胶柱层析、HPLC制备等分离技术进行杀虫活性分子分离研究；对高活性分子致毒供试虫后，采用电镜技术、生化测定方法，观察细胞致毒靶标和测定代谢酶类变化规律，阐明活性分子的杀虫机制；在此基础上，对鲤口服或注射高活性分子，采用HPLC和LC-MS等分析方法，检测并鉴定活性分子在鱼体各组织器官分布、药代学参数和药物残留基团种类，明确活性分子代谢机制。该研究的成功开展不但为杀灭鱼类寄生虫新渔药研究奠定理论基础，同时也为今后无公害渔药基础创新研究提供了新思路和模板，具有重要科学理论意义和应用前景。

本项目在建立金鱼寄生中型指环虫药物筛选模型和方法基础上，对从中草药小果博落回分离的血根碱、隐品碱、β-别隐品碱、原阿片碱和6-甲氧基-二氢白屈菜红碱进行杀虫测定，达100%杀虫率的浓度分别为0.7、8.0、8.0、16.0及7.0 mg/L，48 h对金鱼LC50分别为1.13、16.12、15.88、21.69及10.91 mg/L，治疗指数分别为3.03、4.82、3.40、2.66、2.99。从盾叶薯蓣分离获得延龄草苷、纤细薯蓣皂苷，48 h对指环虫EC50分别为26.48和0.18 mg/L，对金鱼 LC50分别为73.11和1.40 mg/L，TI分别为2.76 和7.78。高活性成分血根碱、纤细薯蓣皂苷杀虫扫描电镜观察：指环虫体表均变得粗糙，粘液增多，破裂、体液外流；透射电镜观察发现：体表结构损坏，体内分泌颗粒、线粒体减少，未见合胞体。质膜损坏并形成嵴，细胞连接损伤。基板致密结构变稀疏，与肌肉连接出现断层。相关代谢酶研究证实：血根碱使可溶性蛋白浓度下降（P＜0.01）；丙二醛含量与时间呈正比，48 h是对照组的5.03倍（P＜0.01）；超氧化物歧化酶的活性在处理6 h后上升，从12 h后开始急剧下降，48 h是对照组的0.47倍（P＜0.01）；总抗氧化活性活性与处理时间负相关，48 h是对照组的0.31倍（P＜0.01）。血根碱作用鱼类时间与免疫基因IFNγ基因表达量呈递减关系，与TNFα1、TNFα2、TGFβ、INOSα、INOSβ和IL1β2表达量均呈抛物线关系，并于第7天达到峰值。细胞毒研究表明：血根碱（1 mg/L及以下）对草鱼肾细胞具增殖作用，48 h细胞未见毒性效应。药代学研究显示：口服血根碱在鲫鱼体内药动学过程符合一级吸收一室开放模型，液相色谱-串联质谱（LC-MS）检测代谢产物为二氢血根碱。该研究的成功开展不但为杀灭鱼类寄生虫新渔药研究奠定理论基础，同时也为今后无公害渔药基础创新研究提供了新思路和模板，具有重要科学理论意义和应用前景。

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