中国特有小型猪中内源性反转录病毒的变异特征及其机制研究

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基本信息

项目摘要

中国特有小型猪有可能发展为异种移植的优良供体。猪内源性反转录病毒（PERV）是猪-人异种移植、猪源制品与生物活性材料中最受关注的病原体，目前其病原性危害尚不明确。本项目是基于五指山猪近交系繁育多代后PERV发生较多G→A突变的研究基础，通过从多代次小型猪基因组中克隆PERV前病毒并测序及比对序列，以探寻随小型猪繁殖代次增加，其中PERV的变异特征。同时，我们推测可能是天然免疫抗病毒分子猪APOBEC3F（pA3F）的作用造成G→A突变并对PERV的复制与增殖造成深远影响，因此通过构建pA3F高表达与低表达的PK15细胞模型，鉴定pA3F对PK15细胞中释放的PERV发生的作用并深入探索其效应。本研究的意义是：探明小型猪中PERV的变异特征及可能的机制，将有助于进行异种移植中的病毒安全性评价及培育PERV阴性表达的小型猪，对于我国特有小型猪的开发利用具有重要意义。

结项摘要

本研究通过从多代次小型猪基因组中克隆PERV前病毒并测序及比对序列，旨在探寻随小型猪繁殖代次增加，其中PERV的变异特征。同时，根据前期研究结果推测可能是天然免疫分子猪APOBEC3F（pA3F）的作用造成G→A突变并对PERV的增殖造成影响，因此通过构建pA3F高表达与低表达的PK15细胞模型，鉴定pA3F对PK15细胞中释放的PERV发生的作用并研究其可能机制。本研究将有助于进行异种移植中的病毒安全性评价及培育PERV阴性表达的小型猪。.主要研究结果包括以下几个方面：.（1）五指山小型猪PERV变异特征研究.扩增近交系连续五代次的五指山小型猪PERV-env基因全长并测序，运用生物信息学方法将其与参考序列进行多重序列比对和遗传进化分析。结果显示，本实验获得的PERV-env核苷酸序列中有较多碱基突变，G→A突变数目相对其他碱基明显较多，且存在偏好位点。.（2）pA3F对PERV的抑制作用研究.在PK-15细胞中利用pA3F过表达及RNA干扰等手段，对PERV-pol mRNA及PERV反转录酶变化进行检测。结果显示，在pA3F过表达的PK-15细胞中PERV-pol mRNA与PERV反转录酶水平与对照相比显著降低（p<0.05），且变化与pA3F的表达量之间具有剂量依赖关系；在pA3F下调细胞中PERV-pol mRNA与PERV反转录酶水平与对照组比较显著提高（p<0.05），其中以沉默pA3F的740-764bp的序列最有效，PERV-pol mRNA增长4.172±0.251倍，反转录酶达到88.58±1.46pg/孔。实验结果表明pA3F对PERV的复制具有抑制作用；.（3）pA3F抑制PERV复制的可能机制研究.收集转染pCDNA3-Flag-pA3F重组质粒的PK15细胞培养上清液，通过超离获得PERV粒子并采用RT-PCR鉴定，再通过Western blot证实pA3F被包装入PERV病毒粒子中。分析稳定表达pA3F的PK15细胞的PERV基因组序列发现，PERV在pA3F持续表达条件下发生了G→A突变，以上结果提示pA3F很可能由PERV-Gag引导被包装入病毒粒子，最终通过胞苷脱氨作用对PERV产生抑制。.通过本课题研究，培养研究生3名，发表SCI论文1篇，国内核心期刊论文4篇，正在整理的英文论文1篇。做特邀/大会报告2次。

项目成果

期刊论文数量（5）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（5）
专利数量（0）
五指山小型猪内源性反转录病毒囊膜基因变异特征研究
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2013
  • 期刊：
    中国预防兽医学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    张念;马玉媛;向思龙;贾俊婷;吴健敏;章金刚
  • 通讯作者：
    章金刚
反转录病毒载体介导的猪APOBEC3F在猪源细胞PK15中的表达
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2012
  • 期刊：
    生物技术通讯
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    罗佳;张念;孙宇;吴健敏;陆芹章;马玉媛;章金刚
  • 通讯作者：
    章金刚
猪APOBEC3F基因克隆及真核表达载体的构建与鉴定
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2011
  • 期刊：
    第三军医大学学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    孙宇;罗佳;马玉媛;章金刚
  • 通讯作者：
    章金刚
应用RNA干扰沉默猪内源性反转录病毒
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2012
  • 期刊：
    生物技术通讯
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    孙宇;马玉媛;罗佳;章金刚
  • 通讯作者：
    章金刚

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其他文献

PD-1/PD-Ls通路的特性及在动物疾病中的研究进展
  • DOI：
    10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.06.29
  • 发表时间：
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  • 期刊：
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  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    岳锋;周娟娟;章金刚;王选年
  • 通讯作者：
    王选年
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  • DOI：
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  • 发表时间：
    2016
  • 期刊：
    临床输血与检验
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    马玉媛;贾俊婷;章金刚
  • 通讯作者：
    章金刚
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  • DOI：
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  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    中国实验动物学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    马玉媛;杨勇贤;章金刚
  • 通讯作者：
    章金刚
新型BCA中基于实时荧光定量PCR的条形码DNA检测体系的建立
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2016
  • 期刊：
    临床输血与检验
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    王蕊;朱凤宣;杨姝;章金刚
  • 通讯作者：
    章金刚
五指山小型猪不同器官内猪内源性反转录病毒的存在与表达
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2018
  • 期刊：
    生物技术通讯
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    范瑞;贾俊婷;钟亚迪;马丽敏;冯书堂;马玉媛;章金刚
  • 通讯作者：
    章金刚

其他文献

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章金刚的其他基金

我国献浆人群中不同基因型人细小病毒B19毒株鉴定及生物学特性分析
  • 批准号：
    81570169
  • 批准年份：
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    30771610
  • 批准年份：
    2007
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  • 资助金额：
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    面上项目
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    8.0 万元
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    面上项目
我国特有小型猪种中猪内源性反转录病毒的存在与特性
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  • 项目类别：
    面上项目

相似国自然基金

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相似海外基金

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  • 财政年份：
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  • 项目类别：
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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

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          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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