sFlt-1基因靶向敲除诱导鼠新生血管性眼底病及其机制的实验研究

Optimal phototransduction requires precise separation of a highly vascularized choroid adjacent to yet not invading the avascular photoreceptor layer. How these contradictory imperatives are reconciled molecularly is unclear. Breakdown of peri-photoreceptor vascular demarcation leads to retinal angiomatous proliferation (RAP) or choroidal neovascularization (CNV), two variants of vascular invasion of the photoreceptor layer in age-related macular degeneration, the leading cause of blindness in the world. This study will confirm that sFLT-1, an endogenous inhibitor of vascular endothelial growth factor-A, is synthesized by the retinal photoreceptors and retinal pigment epithelium, and is decreased in age-related macular degeneration. Suppression of sFLT-1 by antibodies, adeno-associated virus -mediated RNA interference, or Cre/lox mediated gene ablation either in the photoreceptor layer or below induces free VEGF-A and abolishes photoreceptor avascularity， and advance two transgenic murine models of age-related macular degeneration.The mechanism of the neovascular retinal desease and sFlt-1 will be studied. All these findings can provide a proof theoretically for gene therapy.

21.正常光信号的产生需要无血管的光感受器与其周围血管丰富的脉络膜分开不被血管侵入。这种矛盾的生理结构的分子机制尚不清楚。无血管的光感受器层被其周血管侵入引起视网膜瘤样增生和脉络膜新生血管化，是年龄相关性黄斑变性（AMD）的两种病理基础。AMD是我国及西方国家最主要的不可逆性盲,其发病机制尚不清楚。本课题将通过观察sFlt-1（可溶性血管内皮生长因子受体1）的表达，首次证实光感受器和视网膜色素上皮细胞（RPE）可以合成sFlt-1， sFlt-1随年龄增加表达下降，尤其是AMD眼明显下降。通过转录、翻译及基因水平，靶向敲除光感受器和视网膜色素细胞 的sFlt-1，诱发新生血管性视网膜病变；以及用Cre/lox技术分别靶向定点敲除光感受器或RPE的Flt-1基因，建立两种不同类型的AMD转基因鼠模型。探讨sFlt-1在维持光感受器无血管特性的作用和AMD的发病机制，为基因治疗提供理论依据。

正常光信号的产生需要无血管的光感受器与其周围血管丰富的脉络膜分开不被血管侵入。这种矛盾的生理结构的分子机制尚不清楚。无血管的光感受器层被其周血管侵入引起视网膜瘤样增生和脉络膜新生血管化，是年龄相关性黄斑变性（AMD）的两种病理基础。AMD是我国及西方国家最主要的不可逆性盲,其发病机制尚不清楚。本课题通过观察sFlt-1（可溶性血管内皮生长因子受体1）的表达，发现光感受器和视网膜色素上皮细胞（RPE）可以合成sFlt-1，sFlt-1 随年龄增加表达下降，尤其是AMD眼明显下降。通过转录、翻译及基因水平，靶向敲除光感受器和视网膜色素细胞的sFlt-1，诱发新生血管性视网膜病变；以及用 Cre/lox 技术分别靶向定点敲除光感受器或RPE的Flt-1基因，证实sFlt-1在维持光感受器无血管特性的关键作用，sFlt-1的下降是AMD发病机制的重要机制。同时，建立了两种不同类型的AMD转基因鼠模型。一种是Cre-loxp靶向敲出RPE/光感受器Flt-1诱导的转基因AMD模型；一种是视网膜下注射RNAi方式降低sFlt-1诱导的AMD模型，从而为深入研究提供动物模型。.其次，比较了活体检查和病理检查脉络膜新生血管（CNV）结果的不同，分别用活体相干断层扫描OCT及病理图片来测量的体积并观察形态学。发现二种方法有一定的相关性，体积约70%。活体检查的体积绝对值大于病理检查的结果。每种发放各有优缺点，意义不同。从而为判断实验结果的可靠性提供依据。.另外，进一步证实VEGF-B的神经保护作用，发现这一保护作用是通过 VEGF受体1实现的，VEGF-B受体FLT-1在大鼠神经损伤时升高，其中mFlt-1升高远远高于sFlt-1。进而发现，mFlt-1的神经保护机制之一，是通过降低凋亡途径实现的，为深入研究VEGF的神经保护的机制提供数据。.在临床方面，通过回顾性分析以及循证医学的方法，进行了抗VEGF治疗的临床疗效以及安全性文章分析的系列研究。 发现抗VEGF治疗安全有效，眼部副作用及全身影响小，不同药物的安全性存在差异，对外周血VEGF含量的影响在术后1-30天有明显不同，需引起关注，为药物四期临床应用安全性方面提供依据。

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