病毒感染中p100蛋白与I-dsRNA相互作用的分子机制研究

结题报告
项目介绍
AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    31170830
  • 项目类别：
    面上项目
  • 资助金额：
    60.0万
  • 负责人：
    何津岩
  • 依托单位：
    天津医科大学
  • 学科分类：
    C0801.固有免疫
  • 结题年份：
    2015
  • 批准年份：
    2011
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2012-01-01 至2015-12-31

项目摘要

病毒感染细胞后常导致胞浆I-dsRNA生成进而下调干扰素反应，p100蛋白可与I-dsRNA相互作用而调控细胞抗病毒过程，但具体机制不清。研究发现，病毒感染后胞浆产生的颗粒结构-应激颗粒（SGs）与I-dsRNA、p100均密切相关：p100参与SGs形成；I-dsRNA可与SGs多个组分相互作用。由此我们提出I-dsRNA-p100-SGs模型，即病毒感染时p100与I-dsRNA结合并招募应激相关蛋白，促进SGs形成；SGs则可能通过提高辅助因子浓度或复合物稳定性来促进p100对I-dsRNA的剪切从而调控干扰素反应。本课题以呼肠孤病毒感染HeLa细胞为研究模型，利用RNA干扰、荧光原位杂交、免疫共沉淀等方法探讨SGs形成在p100与I-dsRNA相互作用中的意义及其对抗病毒反应的调控，有助于丰富细胞对抗病毒的分子生物学理论，为临床抗病毒感染治疗提供新思路。

结项摘要

病毒感染后胞浆产生应激颗粒，与I-dsRNA，p100均密切相关。本项目以病毒处理Hela 细胞为模型，从p100蛋白表达，SGs形成，蛋白质磷酸化等方面着手，探讨p100蛋白在病毒感染引起的应激颗粒中的可能调控作用。首先我们通过免疫荧光实验来确定p100蛋白是否存在于病毒引起的应激颗粒中。由于本实验室获得的MRV病毒毒株毒力太弱，因此换用了柯萨奇B3病毒感染Hela细胞，并以此作为研究模型。柯萨奇B3病毒感染Hela细胞后，引起了应激颗粒的形成，同时p100与TIA-1存在共定位现象，说明p100蛋白存在于病毒感染形成的应激颗粒中。在此基础上我们进行了机制研究，为了确定p100蛋白是否在病毒应激过程中受到影响或是发挥作用，我们采用转染Poly IC模拟病毒感染的过程。我们发现当以Poly IC模拟病毒感染可以引起HeLa细胞在应激条件下发生多聚糖体的解聚表明此时细胞的蛋白翻译过程被中止。利用磷酸化抗体，采用LI-COR Odyssey®近红外双色激光成像系统，我们发现应激条件下对p100蛋白的蛋白表达水平无变化，但其自身Tyr、Thr以及Ser磷酸化水平增加，同时翻译起始因子eIF2蛋白的ser51发生磷酸化。最后我们用in-cell Odyssey法分析了p100-T103位点在HeLa细胞内的磷酸化变化。实验发现p100-T103磷酸化并不是随着应激时间的延长呈直线式上升，而表现为一定的波动式；表明在应激状态下p100-T103位点可能存在一个动态的磷酸化/去磷酸化动态变化过程。为进一步探讨JNK和p100蛋白在应激中的相互作用，我们给予细胞JNK抑制剂，观察其对于应激颗粒形成的影响，结果显示在应激条件下，在JNK抑制剂处理后， T103的磷酸化水平明显降低，也从另一个方面证明了激活的JNK对于T103的磷酸化作用。同时免疫荧光结果显示当给予JNK抑制剂以后应激颗粒的形成也受到一定影响。有意思的是实验发现在应激与非应激条件下，核内的磷酸化T103都是明显多于核外的，而且并没有受到抑制剂的影响。于是我们分离了胞浆、胞核裂解液，发现在HeLa细胞的细胞核中并没有JNK存在，这就暗示我们在核内可能还存在着其他能够直接磷酸化T103的激酶。而且在该刺激条件下，还发现p100蛋白有出核的现象，至于出核的p100蛋白是参与什么细胞生物学功能还有待进一步研究。

项目成果

期刊论文数量（12）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
活细胞内人IGFBP2-3rsquo;UTR基因的GFP-MS2荧光系统标记
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2014
  • 期刊：
    J Med Mol Biol
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    何津岩
  • 通讯作者：
    何津岩
ｐ１００ 蛋白表达抑制的ＨｅｐＧ２ 肝癌细胞稳定株的建立
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2012
  • 期刊：
    医学分子生物学杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    何津岩
  • 通讯作者：
    何津岩
hnRNP A1的增强型绿色荧光标记及细胞应激定位分析
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2014
  • 期刊：
    天津医药
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    张纬;何津岩;姚智;杨洁
  • 通讯作者：
    杨洁
Histone H3k9 and H3k27 Acetylation Regulates IL-4/STAT6-Mediated Igepsilon Transcription in B Lymphocytes.
组蛋白 H3k9 和 H3k27 乙酰化调节 B 淋巴细胞中 IL-4/STAT6 介导的 Igepsilon 转录。
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2015
  • 期刊：
    Anat Rec (Hoboken)
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    Fu, Xue;Yang, Jie;Liu, Xin;He, Jinyan
  • 通讯作者：
    He, Jinyan
活细胞内人IGFBP2-3#39;UTR基因的GFP-MS2荧光系统标记
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2014
  • 期刊：
    医学分子生物学杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    刘欣;于林;杨洁;何津岩
  • 通讯作者：
    何津岩

数据更新时间：{{ journalArticles.updateTime }}

{{ item.title }}
{{ item.translation_title }}
  • DOI：
    {{ item.doi || "--"}}
  • 发表时间：
    {{ item.publish_year || "--" }}
  • 期刊：
    {{ item.journal_name }}
  • 影响因子：
    {{ item.factor || "--"}}
  • 作者：
    {{ item.authors }}
  • 通讯作者：
    {{ item.author }}

数据更新时间：{{ journalArticles.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者：
    {{ item.authors }}

数据更新时间：{{ monograph.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者：
    {{ item.authors }}

数据更新时间：{{ sciAawards.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者：
    {{ item.authors }}

数据更新时间：{{ conferencePapers.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者：
    {{ item.authors }}

数据更新时间：{{ patent.updateTime }}

其他文献

活细胞内人IGFBP2-3’UTR基因的GFP-MS2荧光系统标记
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2014
  • 期刊：
    医学分子生物学杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    刘欣;于林;杨洁;何津岩
  • 通讯作者：
    何津岩
活细胞内人AGTR1-3‘UTR的荧光标记及应激定位分析
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2014
  • 期刊：
    中国细胞生物学学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    段中潮;付晓;何津岩;杨洁
  • 通讯作者：
    杨洁
组蛋白H3K9和H3K27乙酰化调控IL-4/STAT6介导的Ige转录活性
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2015
  • 期刊：
    THE ANATOMICAL RECORD
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    付雪;杨洁;刘欣;何津岩
  • 通讯作者：
    何津岩
SND1低表达宫颈癌CasKi细胞稳定株的构建及其生物学功能变化
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2017
  • 期刊：
    山东医药
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    孟浩;付晓;张春燕;辛灵彪;任媛媛;杨洁;何津岩
  • 通讯作者：
    何津岩
span style=font-family: ; tahoma?,?sans-serif?;font-size:10.5pt;?=p100/spanspan style=font-family: ; 微软雅黑?,?sans-serif?;font-size:10.5pt;?=蛋白表达抑制的/spanspan style=fon
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2012
  • 期刊：
    医学分子生物学杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    田潇;尹洁;丁建民;史雪彬;何津岩;张毅;高星杰;经翔;杨洁
  • 通讯作者：
    杨洁

其他文献

{{ item.title }}
{{ item.translation_title }}
  • DOI：
    {{ item.doi || "--" }}
  • 发表时间：
    {{ item.publish_year || "--"}}
  • 期刊：
    {{ item.journal_name }}
  • 影响因子：
    {{ item.factor || "--" }}
  • 作者：
    {{ item.authors }}
  • 通讯作者：
    {{ item.author }}
empty
内容获取失败，请点击重试
重试联系客服
title开始分析
查看分析示例
此项目为已结题，我已根据课题信息分析并撰写以下内容，帮您拓宽课题思路：

AI项目思路

AI技术路线图

相似国自然基金

{{ item.name }}
  • 批准号：
    {{ item.ratify_no }}
  • 批准年份：
    {{ item.approval_year }}
  • 资助金额：
    {{ item.support_num }}
  • 项目类别：
    {{ item.project_type }}

相似海外基金

{{ item.name }}
{{ item.translate_name }}
  • 批准号：
    {{ item.ratify_no }}
  • 财政年份：
    {{ item.approval_year }}
  • 资助金额：
    {{ item.support_num }}
  • 项目类别：
    {{ item.project_type }}
{{ showInfoDetail.title }}

作者：{{ showInfoDetail.author }}

知道了

AI项目解读示例

课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

        graph TD
          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
关闭
close
客服二维码