利用改良型cDNA-AFLP技术筛选木薯抗旱相关基因

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基本信息

  • 批准号：
    31000537
  • 项目类别：
    青年科学基金项目
  • 资助金额：
    17.0万
  • 负责人：
    陈新
  • 依托单位：
    中国热带农业科学院
  • 学科分类：
    C0602.基因表达及非编码序列调控
  • 结题年份：
    2013
  • 批准年份：
    2010
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2011-01-01 至2013-12-31

项目摘要

木薯（Manihot esculenta Crantz）是世界三大薯类作物之一和我国发展燃料乙醇的重要原料。木薯抗旱能力突出，具备独特的抗旱调节机制，但木薯抗旱的机理尚未阐明。cDNA-AFLP是一种经济且高通量的筛选差异表达基因的实验技术，本研究提出的改良型cDNA-AFLP技术将解决其转录获得片段（Transcript-derived fragment,TDF）不能达转录起始位点的不足，使其TDF将多始于转录起始位点，包含5'UTR，且可方便地获得基因的全长cDNA。本研究将建立改良型cDNA-AFLP技术体系，并利用该技术筛选木薯品种间不同干旱胁迫处理样品的差异表达TDF。进而，对干旱诱导表达的TDF进行克隆，功能注释和时空表达验证，并克隆10-20个木薯抗旱相关基因的全长cDNA，为后续的功能验证和木薯抗旱机理的研究奠定基础。

结项摘要

本研究以干旱胁迫处理木薯叶片为媒介，建立和优化了改良型cDNA-AFLP技术体系，并利用改良型技术筛选到约100个在干旱胁迫处理下发生差异表达的木薯转录获得片段（Transcript Derived Fragment, TDF），并对其中68个TDF进行了克隆、测序和功能注释。研究结果表明，改良型技术的关键步骤已经完成，MmeI内切酶的识别位点已经整合到双链cDNA中，而且改良型技术所获得的TDF明显更加靠近转录起始位点。此外，通过采用qRT-PCR技术进行验证，表明多数差异表达TDF确实在干旱胁迫下显著地上调或下调，而且部分差异表达TDF的同源基因为已报道的抗旱或抗旱相关基因。总的来说，改良型cDNA-AFLP技术体系已初步建立且尚需完善，差异表达TDF所含的信息还需进一步挖掘以服务于木薯抗旱遗传改良。

项目成果

期刊论文数量（2）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
利用改良型cDNA-AFLP 技术筛选木薯干旱胁迫相关基因
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2013
  • 期刊：
    热带作物学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    王宇阳;陈新等
  • 通讯作者：
    陈新等
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  • DOI：
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  • 发表时间：
    2011
  • 期刊：
    中国农学通报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    漆雪琳;李博;宋顺;陈新;彭明
  • 通讯作者：
    彭明

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  • 通讯作者：
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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

        graph TD
          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
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