抗菌肽CAMP及S100A8/A9基因启动子甲基化与口腔鳞癌的相关性及其机制研究

结题报告

项目介绍

AI项目解读

基本信息

批准号：
81760490
项目类别：
地区科学基金项目
资助金额：
32.0万
负责人：
邹先琼
依托单位：
桂林医学院
学科分类：
H1805.肿瘤表观遗传
结题年份：
2021
批准年份：
2017
项目状态：
已结题
起止时间：
2018-01-01 至2021-12-31

项目参与者：
林军；陈颖；唐滢；梁丽华；王小燕；
关键词：
口腔和口咽部肿瘤启动子基因表达口腔鳞状细胞癌 DNA甲基化

项目摘要

The correlation between human cathelicidin antimicrobial protein (CAMP) and S100A8/A9 gene and oral squamous cell carcinoma （OSCC）has been reported. Some evidences for the transcriptional regulation of promoter methylation of CAMP and S100A8/A9 gene also exist. We assume that methylation of specific CpG sites at CAMP and S100A8/A9 gene promoter region affect binding of specific transcription factors or Methyl-CpG binding proteins to regulate gene expression, which play important roles in the carcinogenesis of OSCC. This project intends to select variety of oral epithelial cancer cells and gingival epithelial cells, to use qRT-PCR, Western Blot analysis, Bisulfite sequencing, Methyl-specific PCR, luciferase activity assay, Electrophoresis mobility shift assay and Chromatin immunoprecipitation assay to study effect and mechanism of gene expression regulated by promoter methylation of CAMP and S100A8/A9 gene in oral epithelial cancer cells. The implementation of this project will deepen our understanding to the epigenetic regulation mechanism of CAMP and S100A8/A9 gene, which would also provide new theoretical basis for prevention, diagnosis and treatment for OSCC and other diseases.

人类抗菌肽CAMP及S100A8/A9基因与口腔鳞状细胞癌的相关性已有报道。启动子甲基化对抗菌肽CAMP及S100A8/A9基因转录调控也存在一些证据。我们假设抗菌肽CAMP及S100A8/A9基因启动子区特异CpG位点的甲基化影响到特异转录因子或甲基化CpG结合蛋白的结合，从而调控基因的表达，进而在口腔鳞状细胞癌发生中发挥了重要的作用。本项目拟选用多种口腔上皮癌细胞及牙龈上皮细胞，应用qRT-PCR、Western Blot、BSP、MSP、荧光素酶活性分析、EMSA及ChIP等研究方法，对抗菌肽CAMP及S100A8/A9基因启动子甲基化在口腔上皮癌细胞中调控基因表达的作用及机制进行研究。本项目的实施将加深抗菌肽CAMP及S100A8/A9基因表观遗传调控机制的认识，为口腔鳞状细胞癌等疾病的预防、诊断和治疗提供新的理论依据。

结项摘要

大部分侵染性细菌通过细胞膜或内涵体摄入进入黏膜上皮细胞，在细胞质内钙卫蛋白（S100A8/A9蛋白二聚体）发挥了重要的抗菌作用，而在内涵体中细菌会遇到抗菌肽CAMP的活性产物LL-37的抵抗。人类抗菌肽CAMP及S100A8/A9基因与口腔鳞状细胞癌的发生发展存在密切关系。启动子甲基化对抗菌肽CAMP及S100A8/A9基因的转录调控也存在一些证据。本项目以RT-qPCR、Western Blot等方法研究抗菌肽CAMP及S100A8/A9基因在口腔上皮癌细胞的表达，以BSP法检测抗菌肽CAMP及S100A8/A9基因启动子甲基化模式，通过EMSA技术、ChIP技术、siRNA技术、突变技术及荧光素酶活性检测技术等研究特异CpG位点结合的转录因子及其对启动子活性的影响。结果表明，在口腔鳞癌细胞中，抗菌肽CAMP及S100A8/A9基因启动子甲基化与表达之间存在显著的负相关性；抗菌肽CAMP及S100A8/A9基因启动子上游有多个CpG位点的甲基化与其表达存在显著的相关性；抗菌肽CAMP基因启动子甲基化可通过干扰转录因子XBP-1和Ap2α的结合直接下调启动子活性；S100A8基因启动子甲基化至少能够通过干扰转录因子XBP-1的结合进而抑制的转录活性；S100A9基因启动子甲基化至少能够通过干扰转录因子p53、C/EBPβ及XBP-1的结合进而抑制基因转录活性。本研究初步阐明了抗菌肽CAMP及S100A8/A9基因启动子甲基化与口腔鳞癌的相关性及作用机制，为口腔鳞状细胞癌等疾病的预防、诊断和治疗提供了新的理论依据。