儿茶素对芳香化酶的作用机制及其衍生化物生物活性和代谢动力学研究

结题报告

项目介绍

AI项目解读

基本信息

批准号：
31100499
项目类别：
青年科学基金项目
资助金额：
23.0万
负责人：
葛建
依托单位：
中国计量大学
学科分类：
C1611.经济林学
结题年份：
2014
批准年份：
2011
项目状态：
已结题
起止时间：
2012-01-01 至2014-12-31

项目参与者：
林芳；张永勇；李明揆；穆丹；梁丽云；王堃；王庆强；
关键词：
芳香化酶抑制生物活性代谢动力学衍生化物儿茶素

项目摘要

内容：（1）从芳香化酶基因、蛋白表达以及基因突变三个层次，开展儿茶素类化合物对芳香化酶转基因细胞内芳香化酶作用机理研究，为寻找新型芳香化酶抑制剂提供依据。（2）利用不同芳香化酶表达系统的细胞株，开展儿茶素类化合物对此类细胞内芳香化酶作用机制差异性研究，为新型、组织特异性芳香化酶抑制剂研究提供方向。（3）开展儿茶素衍生化物在机体内代谢动力学特征及生物活性研究，从而深入阐明儿茶素衍生化物的体内代谢动力学规律及其生物活性机制。.意义：乳腺癌、子宫内膜癌等雌激素依赖性疾病已成为女性发病率较高的恶性疾病，体内雌激素变化是引起此类疾病发生的重要因素，而芳香化酶是雌激素代谢过程中的关键酶类，已作为此类疾病治疗的关键靶点。儿茶素类化合物为茶叶及茶制品中的主要活性成分，具有芳香化酶抑制活性。因此，深入阐明儿茶素及衍生化物活性机制和体内动力学过程，对筛选活性强、组织特异性高的芳香化酶抑制剂具有重要意义。

结项摘要

本项目首先开展了儿茶素EGCG在机体内代谢动力学研究，结果表明儿茶素EGCG大剂量给药后，其分布半衰期约为0.3h，消除半衰期约为3h，同时其代谢动力学具有显著的性别差异性，大剂量腹腔注射儿茶素急性肝损伤也具有显著的性别差异。其代谢酶主要为羧酸酯酶II。其次，本项目还在儿茶素对小鼠体内芳香化酶的基因和蛋白表达作用方面进行了研究，研究发现腹腔注射儿茶素EGCG能够显著抑制小鼠睾丸间质细胞中芳香化酶表达，从而影响了小鼠体内类固醇激素的代谢过程，对体内激素依赖性疾病的预防和干预具有显著保健功能。进一步深入研究发现，儿茶素对体外培养的乳腺癌细胞株SK-BR-3的毒性较低，细胞药物动力学结果显示儿茶素EGCG在该细胞内分布较少，难以通过跨膜转运进入细胞内。同时儿茶素EGCG对乳腺癌MCR-7、SK-BR-3和中国仓鼠卵巢细胞CHO芳香化酶过表达细胞株中芳香化酶基因表达差异不显著（p＞0.05）。因此，儿茶素对机体雌激素及其代谢酶的调控作用，可能是通过儿茶素对胆固醇代谢的影响以及儿茶素体内降解产物的干预作用，此研究尚需进一步深入探索。.本项目还根据儿茶素类化合物具有多羟基、极性较强以及水溶性较高的特性，开展了利用乙酸酐作为衍生化试剂，制备乙酰化儿茶素，并对其吸光度进行全波长扫描，然后利用HPLC分析技术进行初步分离和分析，然后采用制备型液相色谱技术进行分离、纯化。同时开展了儿茶素EGCG衍生物的体内外抗氧化、清除自由基、还原能力等生物学活性，并对其体内代谢动力学特征进行了初步探索。结果表明儿茶素EGCG衍生物体外抗氧化能力有所降低，但体内生物利用度方面具有一定的增强作用。.课题组前期研究发现，邻苯二甲酸酯类（PAEs）能够显著影响机体芳香化酶的基因表达，同时对体内类固醇激素代谢均有明显干扰作用，从而表现出强烈的生殖毒性。考虑到儿茶素在抗氧化以及对芳香化酶表达的影响，本项目对儿茶素的保健解毒活性进行深入探索，研究发现儿茶素对PAEs类化合物所致生殖毒性具有显著的保护功能，儿茶素能够显著改善PAEs所致的小鼠体重和睾丸指数的下降、肝脏线粒体损伤以及类固醇激素代谢紊乱。在生殖细胞凋亡方面，儿茶素能够保护PAEs所致小鼠曲细精管内皮生精细胞的凋亡，并显著增强小鼠睾丸间质细胞内芳香化酶基因和蛋白表达。.