中药复方制剂"仙灵骨葆"抗骨质疏松活性成分研究

人口老龄化使骨质疏松症对人类危害加剧。中药复方制剂"仙灵骨葆"抗骨质疏松临床疗效显著，但其抗骨质疏松活性作用物质基础及作用机理尚无研究报道，开展相关研究极为重要。在以国际公认骨质疏松动物模型确定了"仙灵骨葆"抗骨质疏松活性部位的前期工作基础上，本项目拟综合运用现代色谱和波谱技术，在HPLC指纹图谱指导下，对活性部位进行系统的化学分离和结构鉴定，并对从活性部位中分离的成分进行成骨细胞、破骨细胞、前成脂细胞分化等与骨代谢相关的体外生物活性评价，阐明该中药复方抗骨质疏松作用物质基础、探讨活性成分对骨调节的作用机理；以液相色谱-多级质谱联用技术对"仙灵骨葆"与该中药复方的各组成中药进行分析对比，并辅以从活性部位得到的化学成分为对照，以查明各活性成分的组成中药来源；利用模式识别及生物信息学方法，解析成分和各活性指标的关系，从而揭示中药复方制剂"仙灵骨葆"中多种活性成分协同防治骨质疏松的科学内涵。

本研究开展了六味中药复方“仙灵骨葆”抗骨质疏松活性成分研究。首先，综合运用现代色谱和波谱技术，在HPLC 指纹图谱指导下，对“仙灵骨葆”活性部位XLGB-C进行系统化学成分研究，从中分离并鉴定了46个化合物。然后，对两个活性部位XLGB-B和XLGB-C中分离获得的共61个成分分别进行促进成骨增值及抑制成脂作用等与骨代谢相关的体外生物活性评价，有54个化合物在某些浓度对部分指标均表现出较好活性，XLGB-B中化合物具有较好促进成骨细胞增殖的活性、但抑制脂肪形成作用较弱，而XLGB-C中化合物促进碱性磷酸酶和抑制脂肪形成的活性均较好；我们对淫羊藿中活性较强的代表成分淫羊藿素进行促进成骨细胞分化和抑制成脂分化作用机制的深入研究，结果表明，淫羊藿素促进细胞质和细胞核中β-catenin的蛋白表达、同时促进β-catenin转核和激活Wnt／β-catenin信号通路是其促进成骨分化和抑制成脂分化的关键。利用液相色谱-多级质谱联用技术，建立了“仙灵骨葆”的HPLC指纹图谱并检识了117个色谱峰的化学结构，通过与各组成中药提取物比较分析确定了它们的药材来源。此外，我们采用UPLC-Q-TOF/MS技术，对“仙灵骨葆”灌胃给以大鼠后血浆中的化学成分进行快速检识，检出来自五味组成中药的57个原型成分，其中30个表现出体外活性的原型成分主要来自其中的三味组成中药，提示这些组成中药对于复方“仙灵骨葆”发挥临床疗效具有十分重要的作用。我们还借助Predict FX靶点预测软件，对上述“仙灵骨葆”的入血成分在体内潜在作用靶点进行了预测，初步筛选出24个与抗骨质疏松活性相关的靶点，分别参与了成骨细胞与破骨细胞的成熟、分化，成骨细胞的骨形成及破骨细胞的骨吸收过程，很多化合物同时命中多个相关靶点，提示该复方中部分化合物可能是通过多个环节协同作用影响骨重建过程。上述研究工作部分揭示了中药复方制剂"仙灵骨葆"的抗骨质疏松药效作用物质和作用机理、在一定程度上诠释了该复方通过多种活性成分、多靶点协同防治骨质疏松的科学内涵。截至目前为止，本研究已发表相关研究论文4篇（含SCI期刊论文2篇、中文核心期刊论文2篇）、已投稿SCI期刊论文2篇、待投稿SCI期刊论文2篇、7次参加国际与国内会议交流并投稿论文摘要4篇、申请中国发明专利2项、培养博士研究生2名及培养硕士研究生2名。

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