肾缺血后血管新生的信号调控机制

结题报告

项目介绍

AI项目解读

基本信息

批准号：
81060059
项目类别：
地区科学基金项目
资助金额：
25.0万
负责人：
崔苏萍
依托单位：
南昌大学
学科分类：
H0502.泌尿系统损伤与修复
结题年份：
2013
批准年份：
2010
项目状态：
已结题
起止时间：
2011-01-01 至2013-12-31

项目参与者：
李悦；阮琼芳；王志剑；邓君；吴珏；杨阳；
关键词：
血管新生肾缺血 microRNA Notch信号通路

项目摘要

肾脏是最易受缺血影响的器官，尽快恢复缺血肾组织的血供是防治肾功能损伤的关键。现有工作及我们的前期研究表明,缺氧/ HIF-VEGF-Notch通路在调控肾缺血后血管新生中可能发挥重要作用,但其具体调控机制尚有待阐明。近来研究发现microRNA(miRNA)对血管新生具有强大的基因调控作用,有研究表明microRNA 126、microRNA 210等缺氧诱导miRNA可靶向VEGF，调控血管新生,分析其极有可能通过影响缺氧/ HIF-VEGF-Notch信号通路参与肾缺血后血管新生的调控。本项目拟采用缺血再灌注肾损伤小鼠模型和血管内皮细胞体外缺氧模型，利用重组慢病毒载体等技术上调或下调特异缺氧诱导miRNA，探讨缺氧诱导miRNA如何影响缺氧/ HIF-VEGF-Notch通路来调控血管新生过程，以进一步揭示肾缺血后血管新生的信号调控机制,为治疗性血管新生选择新的治疗靶点提供理论依据。

结项摘要

血管新生是缺血后一系列重要生理反应，是指从内皮细胞及健存的血管长出新的微血管的过程。肾缺血后血管新生的精确保护机制尚未阐明。VEGF信号是肾血管新生重要刺激因子，但Notch和肾血管新生的关系尚不清楚。近年报道，miRNA在缺血后血管新生中起到重要作用，但肾缺血后，miRNA能否调控肾脏血管新生及其调控机制尚不清楚。为此，我们采用基因芯片技术建立Balb/c小鼠缺血肾组织miRNA的表达谱，筛选出差异表达的与血管生成相关miRNA。随后探讨了肾缺血后血管新生的分子机制。我们首先建立了Balb/c小鼠急性肾缺血损伤模型，通过肾功能指标及病理证实模型成功。免疫组织化学染色检测缺血肾组织CD31表达发现肾缺血区毛细血管密度增加。为确定miRNA的改变是否和肾缺血密切相关，我们通过建立缺血肾组织miRNA表达谱，发现了与肾缺血后血管新生相关的miRNAs：76个miRNAs 出现两倍以上的表达变化，有40个miRNAs表达下调，36个miRNAs 表达上调。其中miR-210、miR-320、miR-126等与血管新生密切相关。我们同时体外建立人脐静脉内皮细胞（HUVEC）缺氧模型，发现HUVEC缺氧后VEGF、VEGFR2、Notch-1、HIF-1的基因和蛋白的表达均上调。进一步提示缺氧后，缺氧相关miRNA可参与HIF-VEGF-Notch信号途径。为明确miR-210是否通过调控VEGF-Notch信号通路涉入肾缺血后血管新生过程，我们通过构建miR-210重组慢病毒载体，并转染HUVEC使其过表达miR-210，发现HUVEC过表达miR-210后VEGF、VEGFR2、Notch-1 mRNA和蛋白表达均上调，血管内皮细胞形成新生血管的能力增强。表明miR-210可通过调控HUVEC中VEGF-Notch信号通路促进血管新生。我们的研究表明，miRNA可通过调控HIF-VEGF-notch信号通路来调控肾缺血后新生血管形成。缺血相关的特异性miRNA作为肾缺血后重要的调节因子，为探讨肾缺血后血管新生机制提供新的思路。