刺五加黄酮干预肉鸡小肠粘膜细胞氧化应激的作用机理研究

结题报告
项目介绍
AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    31872515
  • 项目类别：
    面上项目
  • 资助金额：
    48.0万
  • 负责人：
    苏建青
  • 依托单位：
    聊城大学
  • 学科分类：
    C1807.中兽医学
  • 结题年份：
    2022
  • 批准年份：
    2018
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2019-01-01 至2022-12-31

项目摘要

The radicals could act an important function in small intestinal mucosa morpholog and function damage of broiler. The antioxidants was used to build oxidation antioxidant balance again. Acanthopanax Senticosus Flavonoids has protected effects against oxidative stress of small intestinal mucosa of broiler. The mechanism and regulation pathway of antioxidant stress Acanthopanax Senticosus Flavonoids is no studied system so far. In this project, cell culture and animal experiment was used to study antioxidant stress mechanism of small intestinal.mucosa in broiler. The cell survival rate, cell morphology and cell apoptosis was studied on Acanthopanax Senticosus Flavonoids against oxidative stress of small intestinal mucosa of broiler. The ELISA, mmunohistochemistry and limulus reagent method was used to research cell membrane function, antioxidant enzymes and lipid peroxidation of small intestinal mucosa cells. The RT-PCR western immunoblot and chemiluminescence analysis were used to analyze oxidation/reduction signaling pathway in cells, including DNA cleavage, mitochondria apoptosis proteins,oxidation/reduction key transcription factors and signaling pathway regulation.This study will supply basic evidence for the antioxidant mechanism of Acanthopanax Senticosus Flavonoids, replenish its anti-stress regulatory mechanism, and provide theoretical direction in clinical application of Acanthopanax Senticosus.
自由基代谢失衡是肉鸡小肠黏膜功能和形态损伤的重要机制，抗氧化剂的使用是重建细胞氧化/抗氧化平衡的重要途径。刺五加黄酮对肉鸡小肠粘膜细胞的氧化应激具有保护作用，但其抗氧化功能的作用机理和调控途径在肉鸡上没有被系统的研究。本项目通过体外细胞培养与动物实验相结合，研究刺五加黄酮对肉鸡小肠粘膜细胞的抗应激机制。通过细胞存活率、细胞形态学和细胞凋亡观察，分析其对应激损伤的保护作用；采用ELISA、免疫组化和鲎试剂法等研究其对细胞膜功能、抗氧化酶和脂质过氧化的作用；采用RT-PCR、蛋白质免疫印迹和光泽精化学发光分析法分析其对其对氧化还原相关信号通路的调控作用，包括DNA断裂，线粒体凋亡蛋白和氧化还原敏感转录因子和信号通路的调控。本项目研究有助于揭示刺五黄酮加对肉鸡小肠细胞氧化损伤的生物学效应，完善刺五加黄酮抗应激的调控机制，为刺五加药物的临床应用提供理论指导。

结项摘要

消化道是肉鸡营养物质消化、吸收和免疫的重要部位，最易受抗生素、重金属、细菌等微生物的刺激，导致肠道粘膜氧化应激，引起免疫反应，产生肠道炎症。刺五加黄酮（ASF）是刺五加重要的药理活性物质之一，具有较好的抗氧化和抗炎效果。.本研究采用超声辅助提取、复合酶辅助提取和低共熔溶剂等方法，获得ASF的最佳提取工艺。通过大孔树脂、不同极性溶剂萃取等方法，对ASF进行纯化，探讨其最佳纯化方法。通过体外抗氧化实验、RAW264.7细胞模型和动物实验，评价ASF的药理活性。结果显示超声辅助乙醇提取ASF的提取率为24.11±0.17mg/g，复合酶辅助提取显示ASF的得率为 36.95±0.05mg/g，甘油和乙酰丙酸（1：1）的低共熔溶剂对ASF的提取率为23.928±0.071mg/g。低共熔溶剂是由天然有机化合物组成，避免了传统提取溶剂乙醇、丙酮等溶剂易挥发，易燃和有毒的危害，符合绿色生态安全要求。大孔树脂筛选显示HPD-600是最佳纯化树脂，纯化后的ASF纯度从28.79% 提高到 50.57%。不同溶剂富集结果显示正丁醇相的ASF萃取率最高，ASF达到61.0±0.344mg/g。体外抗氧化实验显示ASF对DPPH自由基、ABTS自由基和羟基自由基的半数抑制浓度(IC50)分别为28.38μg/mL、103.77μg/mL和228.70μg/mL，并具有较强的总还原能力。H2O2诱导RAW264.7细胞氧化应激模型显示ASF可以降低细胞内 ROS 水平以及 MDA 含量，提高 SOD 活性。小鼠DSS诱导结肠炎模型显示，刺五加总黄酮能够提高结肠组织CAT、SOD、GPx活性，并降低MDA含量。肠道菌群16S r RNA测序结果显示，ASF可以提高小鼠肠道菌群的多样性，增加厚壁菌门比例，降低拟杆菌门比例，在一定程度上使被破坏的微生物群趋于正常。肉鸡临床实验显示，ASF提取物可以改善肉鸡肠粘膜的病理状态，提高饲料消化率，且抑制炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α的分泌。本研究采用现代化的提取方法，从刺五加中提取、纯化其有效成分ASF，是刺五加药材高效应用和刺五加中药产品提质升效的基础，使用现代化的药理学和组学研究，是解决ASF治疗肉鸡肠道氧化应激机制的的重要途径。

项目成果

期刊论文数量（14）
专著数量（0）
科研奖励数量（1）
会议论文数量（0）
专利数量（5）
刺五加有效成分提取及在动物生产中的应用
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2021
  • 期刊：
    饲料研究
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    王晓娅;苏建青;褚秀玲
  • 通讯作者：
    褚秀玲
Preparation and Properties of Cyclodextrin Inclusion Complexes of Hyperoside.
金丝桃苷环糊精包合物的制备及性能
  • DOI：
    10.3390/molecules27092761
  • 发表时间：
    2022-04-25
  • 期刊：
    MOLECULES
  • 影响因子：
    4.6
  • 作者：
    Zhang, Xinyu;Su, Jianqing;Wang, Xiaoya;Wang, Xueyan;Liu, Ruixue;Fu, Xiang;Li, Ying;Xue, Jiaojiao;Li, Xiaoli;Zhang, Rui;Chu, Xiuling
  • 通讯作者：
    Chu, Xiuling
乌鸡肠道中一株乳酸菌的 分离鉴定及生物学特性研究
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2022
  • 期刊：
    中国饲料
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    付祥;刘晓娜;刘瑞雪;苏建青;褚秀玲
  • 通讯作者：
    褚秀玲
Enzyme-Assisted Ultrasonic Extraction of Total Flavonoids from Acanthopanax senticosus and Their Enrichment and Antioxidant Properties
酶辅助超声提取刺五加总黄酮及其富集和抗氧化特性
  • DOI：
    10.3390/pr9101708
  • 发表时间：
    2021-09
  • 期刊：
    processes
  • 影响因子：
    3.5
  • 作者：
    ruixue liu;xiuling chu;janqing su;xiang fu;qibin kan;xiaoya wang;xinyu zhang
  • 通讯作者：
    xinyu zhang
A Green Method of Extracting and Recovering Flavonoids from Acanthopanax senticosus Using Deep Eutectic Solvents.
低共熔溶剂提取回收刺五加中黄酮类化合物的绿色方法
  • DOI：
    10.3390/molecules27030923
  • 发表时间：
    2022-01-29
  • 期刊：
    Molecules (Basel, Switzerland)
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    Zhang X;Su J;Chu X;Wang X
  • 通讯作者：
    Wang X

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其他文献

抗病毒中草药研究进展
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    中兽医学杂志，（1）：33～38，2006．
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    褚秀玲;苏建青;韦旭斌*;等
  • 通讯作者：
    等
马立克氏病毒38kD磷蛋白pp38基因
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    中国兽医学报，27（4）：451～454，2007．
  • 影响因子：
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  • 作者：
    褚秀玲;苏建青;韦旭斌*;等
  • 通讯作者：
    等
人参皂苷及其衍生物体外抗马立克
  • DOI：
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  • 发表时间：
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  • 期刊：
    中兽医学杂志，（5）：34～37，2007．
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    苏建青;褚秀玲;韦旭斌*;等
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    等

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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

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          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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