FTCD-L蛋白在植物细胞高尔基体上的分布与作用

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基本信息

  • 批准号：
    30971435
  • 项目类别：
    面上项目
  • 资助金额：
    31.0万
  • 负责人：
    李岩
  • 依托单位：
    中国农业大学
  • 学科分类：
    C0701.细胞器及亚细胞结构、互作与功能
  • 结题年份：
    2012
  • 批准年份：
    2009
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2010-01-01 至2012-12-31

项目摘要

构建拟南芥FTCD-L基因的GST标签原核表达质粒，在细菌中诱导表达FTCD-L蛋白；利用GST亲和层析柱纯化FTCD-L蛋白，并制备相应的特异抗体；通过免疫标记方法，结合荧光和电子显微镜观察，精确确定FTCD-L蛋白在植物细胞高尔基体上的分布。通过共沉淀等方法，分析FTCD-L蛋白是否与微管结合；通过免疫荧光双标方法，分析FTCD-L与微管骨架在植物细胞中的相关；通过双转化方法，观察FTCD-L在拟南芥细胞中沿微管的动态分布。利用RNAi、T-DNA插入突变和超表达等分子遗传学方法，抑制或改变FTCD-L基因在拟南芥中的表达程度，并结合高尔基体分布与结构的荧光和电镜观察，分析FTCD-L蛋白在植物细胞高尔基体结构与功能方面的调控作用。我们希望在本项目的研究基础上，提出植物细胞内FTCD-L蛋白与微管骨架相互作用，进而参与高尔基体结构与功能调控的新观点。

结项摘要

构建了拟南芥FTCD-L 基因的His标签原核表达质粒，在细菌中诱导表达FTCD-L 蛋白；利用和层析柱纯化到FTCD-L 蛋白，并制备了相应的特异抗体；通过免疫印迹方法，确定该蛋白分子量约为33kDa，与理论预测的分子量相符。通过免疫标记方法，结合荧光和电子显微镜观察，精确确定FTCD-L 蛋白定位在植物细胞高尔基体上TGN的囊泡外周；并确定蛋白N端在与高尔基体TGN结合方面其主要作用。通过共沉淀等方法，发现FTCD-L 蛋白无法与微管结合。利用T-DNA 插入突变和超表达等分子遗传学方法，抑制或改变FTCD-L 基因在拟南芥中的表达程度，发现当在含高浓度琼脂（1-3%）的1/2MS培养基中生长时，培养7天的过表达拟南芥植株根的生长速度比野生型要快，而T-DNA line根的生长速度则慢于野生型。进一步分析发现，T-DNA line的根冠细胞分泌能力低于野生型拟南芥。有关研究表明，植物FTCD-L蛋白在高尔基体TGN囊泡形成或分泌方面起重要作用。

项目成果

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  • 通讯作者：
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  • 通讯作者：
    李岩

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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

        graph TD
          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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