重组腺相关病毒介导的游离受体抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒感染作用研究

结题报告
项目介绍
AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    31902303
  • 项目类别：
    青年科学基金项目
  • 资助金额：
    25.0万
  • 负责人：
    夏文龙
  • 依托单位：
    盐城师范学院
  • 学科分类：
    C1806.兽医传染病学
  • 结题年份：
    2022
  • 批准年份：
    2019
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2020-01-01 至2022-12-31

项目摘要

Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) enters porcine monocyte/macrophage lineage by receptor-mediated endocytosis. Sialoadhesin (Sn) and CD163 are the key cellular receptors for PRRSV infection. Our previous studies showed that Sn and CD163 soluble receptors delivered by recombinant adenovirus (rAdv) have an additive antiviral effect against PRRSV in vitro and vivo. However, rAdv only keep a short expression in pigs due to its high immunogenicity. To overcome the disadvantage and investigate the inhibition mechanism of PRRSV infection by the two soluble receptors, we plan to construct a recombinant adeno-associated virus (rAAV) vector fusion expressing Sn and CD163 soluble receptors, and delineate the blocking effect in different steps of PRRSV infection (including attachment, internalization, replication and release, etc) by the two soluble receptors on target cells. Then inhibitory duration and dose-dependent of rAAV against different PRRSV strains will be detected. In addition, PRRSV-naïve piglets will be inoculated with rAAV to monitor the duration of the two soluble receptors by established quantitative detection method, and the inhibitory effect against PRRSV proliferation in vivo will be evaluated by antiviral experiment. These studies will provide a new idea for the prevention and control of PRRS.
猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）通过受体介导的胞吞作用侵入猪单核-巨噬细胞系统，唾液酸黏附素（Sn）和CD163分子是参与感染的关键细胞受体。前期研究证实重组腺病毒（rAdv）介导的Sn和CD163游离受体能在体内外协同抑制PRRSV感染，然而rAdv载体的高免疫原性导致其在猪体内表达时间较短，为克服该弊端并探明两种游离受体抑制PRRSV感染机制，本项目拟构建融合表达Sn和CD163游离受体的重组腺相关病毒（rAAV），从PRRSV吸附、内化、复制和释放等环节研究两种游离受体对病毒感染靶细胞阻断作用，进而检测rAAV对不同PRRSV毒株感染的抑制时间和剂量依赖关系；另外，将rAAV接种PRRSV易感猪，利用已建立的定量检测方法监测两种游离受体在猪体内持续时间，通过抗病毒试验评价rAAV对PRRSV体内增殖的抑制作用，为PRRS的防控研究提供新的思路。

结项摘要

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是影响养猪业健康发展的重要疫病，现有PRRS疫苗交叉保护效果不佳，且尚无特效治疗药物。PRRS病毒（PRRSV）通过受体介导的胞吞作用侵入靶细胞，CD163分子和唾液酸黏附素（Sn）是参与感染的关键细胞受体。病毒游离受体又称病毒受体陷阱，是指利用人工构建的可溶性病毒受体与细胞受体竞争性结合病毒，从而发挥类似中和抗体的作用。.前期研究证实表达CD163和Sn游离受体的2个重组腺病毒（rAdv）可在体内外协同抑制PRRSV感染，但rAdv载体的高免疫原性导致其在猪体内表达时间较短。本项目以重组腺相关病毒（rAAV）为载体，利用杆状病毒-昆虫细胞系统，制备了融合表达CD163和Sn游离受体的rAAV-SRCR59-Fc/Sn4D-Fc，SRCR59-Fc和Sn4D-Fc编码序列通过P2A剪切肽串联。该rAAV体外转导猪源细胞后，能正确分泌表达2个游离受体，并能有效抑制不同PRRSV毒株感染。浓缩纯化获得游离受体蛋白后，进一步研究发现，Sn4D-Fc能够阻断PRRSV吸附靶细胞，SRCR59-Fc主要在病毒内化阶段发挥阻断作用。将rAAV接种仔猪，定期监测猪血清中的游离受体含量，发现可持续35-40天，二次接种后，可继续表达30-35天。随后进行PRRSV攻毒保护试验，从临床症状、病理观测、病毒血症、组织器官病毒载量等方面评价抗病毒效果，结果证实，rAAV接种仔猪后能有效抑制PRRSV感染，且对PRRSV不同毒株均有抑制作用，说明rAAV介导的游离受体可以为猪体提供被动免疫来抵御PRRSV感染。.本研究构建的rAAV可作为PRRS防治生物制剂进一步开发，为PRRS防控提供了新的思路，也为其他易变RNA病毒的抗感染研究提供了有益借鉴。

项目成果

期刊论文数量（3）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（2）
反转录-重组酶介导等温扩增(RT-RAA)快速检测基因2型猪繁殖与呼吸综合征病毒
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2023
  • 期刊：
    中国动物检疫,2023,40(01):121-127.
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    陈耀;仲欣雨;吴陈雨;丁雪;黄璟;王欢莉;范忠军;孙静;陈星逸;余树培;夏文龙
  • 通讯作者：
    夏文龙
Fusion expression of the two soluble viral receptors of porcine reproductive and respiratory syndrome virus with a single adeno-associated virus vector
猪繁殖与呼吸综合征病毒的两种可溶性病毒受体与单个腺相关病毒载体的融合表达
  • DOI：
    10.1016/j.rvsc.2020.12.026
  • 发表时间：
    2021
  • 期刊：
    Research in Veterinary Science
  • 影响因子：
    2.4
  • 作者：
    Xiaoming Liu;Wenlong Xia;Xinyu Zhang;Xiaoli Xia;Huaichang Sun
  • 通讯作者：
    Huaichang Sun
Rapid and Visual Detection of Type 2 Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus by Real-Time Fluorescence-Based Reverse Transcription Recombinase-Aided Amplification
通过实时荧光逆转录重组酶辅助扩增快速、直观地检测 2 型猪繁殖与呼吸综合征病毒
  • DOI：
    10.3390/v14112526
  • 发表时间：
    2022-11-15
  • 期刊：
    Viruses
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    Xia W;Chen Y;Ding X;Liu X;Lu H;Guo C;Zhang H;Wu Z;Huang J;Fan Z;Yu S;Sun H;Zhu S;Wu Z
  • 通讯作者：
    Wu Z

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其他文献

多核并行计算技术在电力系统短路计算中的应用
  • DOI：
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  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    电力系统自动化
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    熊玮;夏文龙;余晓鸿;林湘宁;XIONG Wei;XIA Wenlong;YU Xiaohong;LIN Xiangning
  • 通讯作者：
    LIN Xiangning
不受潮流转移影响的距离后备保护动作特性自适应调节研究
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    中国电机工程学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    林湘宁;LI Zhengtian;Liu Xiaochun;LIU Jianzhe;夏文龙;熊玮;李正天;刘小春;刘健哲;LIN Xiangning;XIA Wenlong;Xiong Wei
  • 通讯作者：
    Xiong Wei

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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

        graph TD
          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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