用体外亲和力成熟技术提高抗HFRS病毒单链抗体结合活性
项目介绍
AI项目解读
基本信息
- 批准号:39700134
- 项目类别:青年科学基金项目
- 资助金额:10.0万
- 负责人:
- 依托单位:
- 学科分类:H1112.免疫治疗及其机制
- 结题年份:2000
- 批准年份:1997
- 项目状态:已结题
- 起止时间:1998-01-01 至2000-12-31
- 项目参与者:王海涛; 吴兴安; 张芳琳; 尹文; 赵茜; 白文涛;
- 关键词:
项目摘要
本研究用随引物PCR和错配PCR两种方法分别突变抗汉滩病毒(HTNV)核蛋白(NP)鼠源性单克隆抗体(mAb)重链可变区(VH)基因的互补决定区3(CDR3)和全长VH基因,分别构建了库容量均为10(7)左右的噬菌体抗体库。表达并纯化NP编码基因5′端300bp的片段与GST的融合蛋白,生物素化后用于上述噬菌体抗体库的亲和筛选,并筛选出亲和力有所提高的抗体。在此基础上,构建了鼠/人嵌合Fab抗体双特异性抗体表达载体,并在E.coli中表达,鉴定它们免疫学特性,证实表达的双特异性抗体的结和活性优于单链抗体(ScFv)和鼠/人嵌合Fab。还构建了细胞内表达的ScFv真核表达载体,在真核细胞内成功表达,并建立稳定转染的细胞系,正在进一步研究细胞内抗体的功能。
结项摘要
项目成果
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