OECs-NT-3基因工程细胞联合NSCs自体移植对自身免疫性脑脊髓炎突触信号传导及髓鞘修复的影响

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基本信息

  • 批准号：
    81171171
  • 项目类别：
    面上项目
  • 资助金额：
    60.0万
  • 负责人：
    郭守刚
  • 依托单位：
    山东大学
  • 学科分类：
    H0910.神经损伤、修复与再生
  • 结题年份：
    2015
  • 批准年份：
    2011
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2012-01-01 至2015-12-31

项目摘要

细胞移植治疗自身免疫性脑脊髓炎(EAE)促进神经修复是理想策略。我们前期研究证明：神经营养因子-3(NT-3)基因修饰的嗅鞘细胞(OECs)可以在EAE宿主内分泌持续恒定的内源性NT-3，且在髓鞘修复方面协同良好；OECs与神经干细胞(NSCs)联合培养可以促进NSCs的存活、迁徙及分化，利于突触连接形成；本研究应用基因工程技术，利用逆转录病毒介导NT-3基因转染自体OECs，构建具有生物活性的OECs-NT-3基因工程细胞，并与自体NSCs联合移植治疗EAE；通过移植细胞的在体示踪，研究移植细胞的迁徙方向、分化行为、趋化性及突触建立情况；通过对宿主模型的髓鞘及轴突的微观形态观察、皮层体感诱发电位、逆行示踪标记技术、流氏细胞术等方法，探索解决移植细胞在宿主环境中持续、稳定分泌NT-3及如何使移植细胞与在体细胞建立有效的突触联系和信号传导等EAE修复的关键问题,为治疗EAE提供新的思路。

结项摘要

一、研究背景：本研究用体外培养较高纯度的嗅鞘细胞（Olfactory ensheathing cells ,OECs）应用基因工程技术，尝试利用逆转录病毒介导人NT-3 基因转染OECs，构建具有生物活性的OECs-NT-3 基因工程细胞，观察其对EAE的治疗作用并探讨其机制。.二、主要研究内容和方法：1.采用原代培养的方法，自人胚胎的嗅球培养出OEC。提取、纯化逆转录病毒载体PN2A-NT-3，建立PA317-NT-3细胞株。并构建OECs-NT-3基因工程细胞。2.测定OECs-NT-3基因工程细胞分泌的NT-3蛋白随时间变化的表达量；检测转染后细胞上清RNA是否相符及表达量；PC12-TrkC细胞共培养实验，对转染后的细胞行MTT细胞增殖实验，观察转染对其生存的影响。3.从形态学结构、神经纤维密度、神经电生理、运动功能学评分及超微结构等方面，基因工程细胞移植对EAE的髓鞘修复及轴突再生的作用。.三、结果：1.OECs-NT-3移植后，可在宿主环境内存活，广泛分布，不仅可以在病灶内迁徙，而且可以在病灶间多点迁徙。2.OECs-NT-3 移植组HRP标记的神经元数目及面积明显多于OECs 移植组。移植4周时， OECs转基因移植组突触素(SYN)抗体染色灰度值显著高于OECs移植组及对照组，提示移植组的神经突触的生长数目明显高于其它组，有利于损伤神经突触的修复，促进神经冲动的传递。3.移植基因工程细胞28天后，单位面积内的神经纤维数目明显高于单纯OECs治疗组第；运动评分均明显高于单纯OECs治疗组。4.移植基因工程细胞4周后，转基因组组潜伏时间与正常相比无显著性差异（P>0.05）。.四、结论和意义：1.利用重组逆转录病毒构建OECs-NT-3 基因工程细胞可以稳定、持久地表达NT-3蛋白，在后代细胞中发挥作用。2.OECs-NT-3移植后，广泛分布，而且可以在灶间多点迁徙，脱髓鞘病灶对OECs的迁徙有趋化影响作用。3.移植基因工程细胞，能减轻神经元损害、促进脊髓轴突的再生；增加神经元数目和面积，利于损伤神经突触的再生。形态学及电生理研究证实，可显著促进髓鞘再生，提高神经传导速度。4.基因修饰的OECs分泌持续、足量的NT-3，起到很好的协同作用，治疗EA效果优于单独移植OECs。5.我们的工作为下一步自体移植的实现做了有益的尝试和先期准备

项目成果

期刊论文数量（6）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
NT-3基因修饰OECs-NSCs-复合细胞支架自体移植治疗脑出血的实验研究
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2014
  • 期刊：
    中华医学杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    林华伟;付佩彩;郭守刚;唐荣华
  • 通讯作者：
    唐荣华
Protective immunity of rAd/NR2B vaccine against concomitant aversiveness of spontaneous neuropathic pain following spinal nerve ligation injury
rAd/NR2B 疫苗对脊髓神经结扎损伤后自发性神经性疼痛伴随厌恶的保护性免疫
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2015
  • 期刊：
    Int J Clin Exp Med
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    Guang-Jie Liu;Kun Cheng;Hua Wang;Shou-Gang Guo
  • 通讯作者：
    Shou-Gang Guo
Transplantation of hyperthermic preconditioning olfactory ensheathing cells combined with neural stem cells in the treatment of central nerve injury
热预适应嗅鞘细胞联合神经干细胞移植治疗中枢神经损伤
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2015
  • 期刊：
    JOURNAL OF BIOLOGICAL REGULATORS AND HOMEOSTATIC AGENTS
  • 影响因子：
    3.2
  • 作者：
    SG .GUO;CJ WANG;YX WANG;CQ QU
  • 通讯作者：
    CQ QU
NT-3基因修饰的嗅鞘细胞移植对自身免疫性脑脊髓炎大鼠神经修复及功能恢复的影响
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2015
  • 期刊：
    中华医学杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    汪春娟,;董泗芹;丛琳;刘光云
  • 通讯作者：
    刘光云
Silencing the NR2B gene in rat ACC neurons by intivirus-delivered shNRA alleviates
通过内病毒传递的 shNRA 沉默大鼠 ACC 神经元中的 NR2B 基因可缓解
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2015
  • 期刊：
    Int J Clin Exp Med
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    Yong Qiao;Hao Feng;Lin Cong;Gong-Ming
  • 通讯作者：
    Gong-Ming

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  • 通讯作者：
    GUO Shou-gang

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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

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          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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