Core D: Protein Production Core
核心 D:蛋白质生产核心
基本信息
- 批准号:7777115
- 负责人:
- 金额:$ 35.64万
- 依托单位:
- 依托单位国家:美国
- 项目类别:
- 财政年份:2009
- 资助国家:美国
- 起止时间:2009-09-30 至 2014-08-31
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:Affinity ChromatographyAgonistAntibody AffinityBiochemicalBioreactorsBrainCell LineCore FacilityDevelopmentEpitopesEquilibriumGated Ion ChannelGeneral anesthetic drugsGoalsHumanInstructionLaboratoriesLeadLigandsLipid BilayersMammalian CellMinorMissionMutationNeuronsPharmacologyPositioning AttributeProductionProteinsResearch PersonnelResourcesServicesSiteSynaptic ReceptorsTechniquesTerminologyTetanus Helper PeptideTimebasedesigndesign and constructionexperiencemembermilligrammutantprogramsreceptorreconstitutionstable cell line
项目摘要
The Protein Production Core's mission is to produce heterologously expressed, purified and reconstituted
human neuronal receptors in the large quantities required for photolabeling and sequencing. This is a
challenging resource-intensive objective best handled by a central facility. During the four years of its
existence, the Core has thoroughly developed several inducible mammalian cell lines capable of expressing
a number of Cys-loop ligand-gated ion channel receptors bearing accessible purification epitopes. With such
cell lines the successive steps of solubilization, purification and reconstitution have been optimized. Two
receptors are now in production in such cell lines, and it is proposed to developed three more. Using its
Bioreactor facility, the Core is now in a position to routinely fulfill its overall specific aim of supplying Projects
1 & 2 with the milligram quantities of well characterized, purified receptors functionally reconstituted into
defined lipid bilayers that are required for photolabeling studies. The specific receptors to be produced in this
way are all human neuronal members of the Cys-loop superfamily. The primary focus is on the inhibitory
receptors, specifically the following GABAA receptors: synaptic receptors composed of subunits aip3y2L:
extrasynaptic receptors composed of subunits a4p36, and aipS receptors to act as controls. The
representative excitatory receptors in the Cys-loop superfamily will be the neuronal nicotinic a4p2 receptor
and the 5-HT3A receptor. A subsidiary goal is to support the needs of investigators involved in
electrophysiological studies (Raines and Forman). They will be able to achieve efficiencies by using the
Core's resources both for the more straightfonward establishment of stable cell lines and for the development
of mutants, although the primary responsibility remains with the investigator thereafter. This latter service will
not detract from the Core's main labor-intensive goal of developing stable, inducible cell lines and over-
expressing human neuronal receptors for photolabeling and biochemical studies. The Core will be situated in
the Mallinckrodt Pharmacology Laboratory at MGH.
RELEVANCE (See instructions):
蛋白质生产核心的使命是生产异源表达、纯化和重组的蛋白质
光标记和测序所需的大量人类神经元受体。这是一个
具有挑战性的资源密集型目标最好由中央设施来处理。在其成立的四年里
存在后,Core 已经彻底开发了几种能够表达
许多带有可接近的纯化表位的半胱氨酸环配体门控离子通道受体。有了这样的
细胞系的溶解、纯化和重构的连续步骤已经过优化。二
受体现已在此类细胞系中生产,并且建议再开发三种。利用其
核心生物反应器设施现在能够定期实现其供应项目的总体具体目标
1 和 2 毫克量的经过充分表征的纯化受体在功能上重构为
确定光标记研究所需的脂质双层。在此产生的特定受体
所有人类神经元成员都是半胱氨酸环超家族的成员。主要关注点是抑制
受体,特别是以下 GABAA 受体:由 aip3y2L 亚基组成的突触受体:
由亚基 a4p36 和 aipS 受体组成的突触外受体作为对照。这
Cys 环超家族中代表性的兴奋性受体是神经元烟碱 a4p2 受体
和5-HT3A受体。一个次要目标是支持参与调查的研究人员的需求
电生理学研究(Raines 和 Forman)。他们将能够通过使用
Core 的资源既可用于更直接地建立稳定细胞系,又可用于开发
突变体,尽管此后主要责任仍然由研究者承担。后一项服务将
不减损核心的主要劳动密集型目标,即开发稳定的、可诱导的细胞系和过度
表达人类神经元受体用于光标记和生化研究。核心区将位于
MGH 的 Mallinckrodt 药理学实验室。
相关性(参见说明):
项目成果
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专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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