IDENTIFICATION OF NOVEL HOST FACTORS INTERACTING WITH NS5A PROTEIN OF HCV
与 HCV NS5A 蛋白相互作用的新型宿主因子的鉴定
基本信息
- 批准号:8171374
- 负责人:
- 金额:$ 0.24万
- 依托单位:
- 依托单位国家:美国
- 项目类别:
- 财政年份:2010
- 资助国家:美国
- 起止时间:2010-09-01 至 2011-08-31
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:AffinityCell LineCellsChronicCirrhosisComplicationComputer Retrieval of Information on Scientific Projects DatabaseDiseaseFamilyFibrosisFlaviviridaeFundingGrantHepatitis C virusHepatitis C-Like VirusesHumanInfectionInflammatoryInstitutionIntegration Host FactorsInternetLiver diseasesMethodsNonstructural ProteinPatientsPrimary carcinoma of the liver cellsProductionProteinsRepliconResearchResearch PersonnelResistanceResourcesRough endoplasmic reticulumSourceStructureUnited States National Institutes of HealthViralViral ProteinsVirionVirusantibiotic G 418hepatoma cellinterestlipid metabolismmembernovelprotein aminoacid sequenceprotein complextraffickingviral RNAvirus envelope
项目摘要
This subproject is one of many research subprojects utilizing the
resources provided by a Center grant funded by NIH/NCRR. The subproject and
investigator (PI) may have received primary funding from another NIH source,
and thus could be represented in other CRISP entries. The institution listed is
for the Center, which is not necessarily the institution for the investigator.
-Background and Aim
Hepatitis C Virus (HCV) is known to establish a lifelong persistent infection causing patient a chronic inflammatory disease, which eventually results in severe complication of liver diseases including fibrosis, cirrhosis and hepatocellular carcinoma. As the sole member of the genus Hepacivirus of Flaviviridae family, this ssRNA virus of plus strand polarity replicates in the cytosolic compartment of infected cells and causes an altered membraneous structure called "membraneous web" which is believed to be extended from rough endoplasmic reticulum, and is associated with actively replicating viral RNA. Although little is known about how this virus establish their microenviroment inside cell, It is becoming of great interest to reveal how HCV is dealing with both lipid metabolism and its trafficking in the context of their demand for virion production as envelope virus.
-Method
Human hepatoma cell line, Huh-7 was transfected with subgenomic replicon RNA, into which Affinity-tag peptide sequence was introduced in the C-terminus region of Nonstructural protein 5A (NS5A). Transfected cells were cultured with G418 supplemented media in order to select cells harbouring replicating viral RNA. Resultant G418-resistant cells were isolated and were found to be expressing affinity-tagged NS5A protein via viral replication. Viral protein complex as well as their interacting host proteins were isolated by affinity-culumn purification and analized by MudPIT in order to identify associating host factors.
该子项目是利用该技术的众多研究子项目之一
资源由 NIH/NCRR 资助的中心拨款提供。子项目和
研究者 (PI) 可能已从 NIH 的另一个来源获得主要资金,
因此可以在其他 CRISP 条目中表示。列出的机构是
中心,不一定是研究者的机构。
-背景和目的
众所周知,丙型肝炎病毒(HCV)会造成终生持续感染,导致患者出现慢性炎症性疾病,最终导致肝脏疾病的严重并发症,包括纤维化、肝硬化和肝细胞癌。 作为黄病毒科肝炎病毒属的唯一成员,这种正链极性的 ssRNA 病毒在受感染细胞的胞质区室中复制,并导致称为“膜网”的膜结构改变,该膜结构被认为是从粗面内质网延伸出来的,并且与病毒 RNA 的活跃复制有关。尽管人们对这种病毒如何在细胞内建立微环境知之甚少,但揭示丙型肝炎病毒如何在其作为包膜病毒产生病毒粒子的需求的背景下处理脂质代谢及其贩运正变得非常有趣。
-方法
人肝癌细胞系 Huh-7 用亚基因组复制子 RNA 转染,其中非结构蛋白 5A (NS5A) 的 C 末端区域引入了亲和标签肽序列。转染的细胞用添加了 G418 的培养基培养,以选择含有复制病毒 RNA 的细胞。分离出所得的 G418 抗性细胞,并发现其通过病毒复制表达亲和标记的 NS5A 蛋白。通过亲和柱纯化分离病毒蛋白复合物及其相互作用的宿主蛋白,并通过 MudPIT 进行分析,以确定相关的宿主因子。
项目成果
期刊论文数量(0)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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