CHARACTERIZATION OF M AERUGINOSA PLASMIDS FOR USE AS CLONING VECTORS
用作克隆载体的铜绿质粒的表征
基本信息
- 批准号:6240191
- 负责人:
- 金额:$ 2.6万
- 依托单位:
- 依托单位国家:美国
- 项目类别:
- 财政年份:1997
- 资助国家:美国
- 起止时间:1997-01-01 至 1997-12-31
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
In order to understand the regulatory mechanisms involved in the
coordinate expression of the PBS subunits, a search for a means of
introducing exogenous DNA into Microcystic was initiated. The primary
goal of this project is to develop a genetic system for studying this
ecologically important cyanobacterium. We recently isolated an 8kb
plasmid, named pMa025, from M.aeruginosa UV025. A hybrid plasmid was
constructed by ligating pMa025 into pUC19. The resultant recombinant
plasmid, pMaUC, is being maintained in E. coli XLI Blue. Our objective
is to use this potential shuttle vector to introduce altered genes in
Microcystic. The work to be carried out during this project includes the
following.
1) Restriction mapping of pMa025 to enable us to a) delete segments to
determine the approximate location of replicon sequences to ensure a
viable plasmid and b) determine insertion sites for constructing
recombinants.
2) Complete sequencing of the plasmid to ascertain if any information,
such as open reading frames and possible procaryotic consensus promoter
sequence, are present on the plasmid. This should provide insight
regarding plasmid function(s).
3) Construction of a shuttle vector using the hybrid plasmid pMaUC. The
appearance of ampicillin resistance provides evidence that pMaUC can
transform M. aeruginosa. The vector will be streamlined to induce only
pUC19, the genes involved in the replication and maintenance of pMa025
and a kanamycin resistance cassette. The resulting shuttle vector will
be tested for its ability to introduce normal or altered genes into
Microcystis and into E. coli.
4) Introduction of modified genes (after deletion or inactivation of
endogenous genes) into Microcystic using the shuttle vector. Isolation
of PBS subunit genes will be undertaken and methods will be developed for
successful transformations using these or modified genes.
5) Characterization of pMa025 in association with its host. Very little
is presently known regarding how cyano bacterial plasmids are maintained
in vivo. In addition to identifying the replicon region, studies of the
in vivo properties of pMa025 will be undertaken. These will include
examining the mechanisms of plasmid partitioning and stability,
quantitating copy number and assaying for variations in copy number with
growth phase.
6) The possible role of plasmids in Microcystic toxin production will be
evaluated.
为了了解其中涉及的调控机制
PBS亚基的坐标表达,寻找一种方法
开始将外源DNA引入微囊。 初级
该项目的目标是开发一个遗传系统来研究这一问题
生态上重要的蓝细菌。 我们最近分离出一个 8kb
质粒,命名为pMa025,来自绿脓杆菌UV025。 杂合质粒是
通过将 pMa025 连接到 pUC19 构建。 所得重组体
质粒 pMaUC 保存在大肠杆菌 XLI Blue 中。 我们的目标
就是利用这个潜在的穿梭载体将改变的基因引入
微囊性。 本项目期间要开展的工作包括
下列的。
1) pMa025 的限制性映射使我们能够 a) 删除片段
确定复制子序列的大致位置以确保
可行的质粒和 b) 确定用于构建的插入位点
重组体。
2) 对质粒进行完整测序以确定是否有任何信息,
例如开放阅读框和可能的原核共有启动子
序列,存在于质粒上。 这应该提供洞察力
关于质粒功能。
3)使用杂合质粒pMaUC构建穿梭载体。 这
氨苄青霉素耐药性的出现提供了 pMaUC 可以
转化绿脓杆菌。 该载体将被简化以仅诱导
pUC19,参与pMa025复制和维持的基因
和卡那霉素抗性盒。 由此产生的穿梭向量将
测试其将正常或改变的基因引入
微囊藻和大肠杆菌。
4) 引入修饰基因(删除或失活后)
使用穿梭载体将内源基因)转化为微囊细胞。 隔离
将进行 PBS 亚基基因的研究并开发方法
使用这些或修饰基因的成功转化。
5)pMa025与其宿主相关的表征。 很少
目前已知如何维持氰基细菌质粒
体内。 除了确定复制子区域之外,还研究了
将研究 pMa025 的体内特性。 这些将包括
检查质粒分配和稳定性的机制,
定量拷贝数并测定拷贝数的变化
生长阶段。
6) 质粒在微囊毒素生产中的可能作用是
评价。
项目成果
期刊论文数量(0)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
数据更新时间:{{ journalArticles.updateTime }}
{{
item.title }}
{{ item.translation_title }}
- DOI:
{{ item.doi }} - 发表时间:
{{ item.publish_year }} - 期刊:
- 影响因子:{{ item.factor }}
- 作者:
{{ item.authors }} - 通讯作者:
{{ item.author }}
数据更新时间:{{ journalArticles.updateTime }}
{{ item.title }}
- 作者:
{{ item.author }}
数据更新时间:{{ monograph.updateTime }}
{{ item.title }}
- 作者:
{{ item.author }}
数据更新时间:{{ sciAawards.updateTime }}
{{ item.title }}
- 作者:
{{ item.author }}
数据更新时间:{{ conferencePapers.updateTime }}
{{ item.title }}
- 作者:
{{ item.author }}
数据更新时间:{{ patent.updateTime }}
SHIRLEY RAPS其他文献
SHIRLEY RAPS的其他文献
{{
item.title }}
{{ item.translation_title }}
- DOI:
{{ item.doi }} - 发表时间:
{{ item.publish_year }} - 期刊:
- 影响因子:{{ item.factor }}
- 作者:
{{ item.authors }} - 通讯作者:
{{ item.author }}
{{ truncateString('SHIRLEY RAPS', 18)}}的其他基金
DEVELOPMENT OF SHUTTLE VECTOR FOR GENE TRANSFER IN MICROCYSTIS AERUGINOSA
铜绿微囊藻基因转移穿梭载体的开发
- 批准号:
6657586 - 财政年份:2002
- 资助金额:
$ 2.6万 - 项目类别:
DEVELOPMENT OF SHUTTLE VECTOR FOR GENE TRANSFER IN MICROCYSTIS AERUGINOSA
铜绿微囊藻基因转移穿梭载体的开发
- 批准号:
6584201 - 财政年份:2002
- 资助金额:
$ 2.6万 - 项目类别:
DEVELOPMENT OF SHUTTLE VECTOR FOR GENE TRANSFER IN MICROCYSTIS AERUGINOSA
铜绿微囊藻基因转移穿梭载体的开发
- 批准号:
6580434 - 财政年份:2002
- 资助金额:
$ 2.6万 - 项目类别:
DEVELOPMENT OF SHUTTLE VECTOR FOR GENE TRANSFER IN MICROCYSTIS AERUGINOSA
铜绿微囊藻基因转移穿梭载体的开发
- 批准号:
6450702 - 财政年份:2001
- 资助金额:
$ 2.6万 - 项目类别:
DEVELOPMENT OF SHUTTLE VECTOR FOR GENE TRANSFER IN MICROCYSTIS AERUGINOSA
铜绿微囊藻基因转移穿梭载体的开发
- 批准号:
6478875 - 财政年份:2001
- 资助金额:
$ 2.6万 - 项目类别:
DEVELOPMENT OF SHUTTLE VECTOR FOR GENE TRANSFER IN MICROCYSTIS AERUGINOSA
铜绿微囊藻基因转移穿梭载体的开发
- 批准号:
6496742 - 财政年份:2001
- 资助金额:
$ 2.6万 - 项目类别:
DEVELOPMENT OF SHUTTLE VECTOR FOR GENE TRANSFER IN MICROCYSTIS AERUGINOSA
铜绿微囊藻基因转移穿梭载体的开发
- 批准号:
6313806 - 财政年份:2000
- 资助金额:
$ 2.6万 - 项目类别:
CHARACTERIZATION OF M AERUGINOSA PLASMIDS FOR USE AS CLONING VECTORS
用作克隆载体的铜绿质粒的表征
- 批准号:
5211809 - 财政年份:
- 资助金额:
$ 2.6万 - 项目类别:
相似国自然基金
小肠中Escherichia coli分泌细菌毒素诱导肠屏障损伤及细菌易位在炎症性肠病中的机制研究
- 批准号:82371775
- 批准年份:2023
- 资助金额:46 万元
- 项目类别:面上项目
鲜用蒲公英拮抗细菌外毒素感染的物质微观结构基础及其关联作用机制
- 批准号:82274220
- 批准年份:2022
- 资助金额:52 万元
- 项目类别:面上项目
质粒编码的新型VapBC毒素-抗毒素系统介导CR-hvKp持留态细菌形成的分子机制
- 批准号:
- 批准年份:2022
- 资助金额:52 万元
- 项目类别:面上项目
基于自动导航荧光微纳马达的细菌毒素检测技术研究
- 批准号:
- 批准年份:2021
- 资助金额:58 万元
- 项目类别:面上项目
巨噬细胞外泌体膜融合脂质体对细菌内外毒素清除作用及机制研究
- 批准号:L2124003
- 批准年份:2021
- 资助金额:58 万元
- 项目类别:面上项目
相似海外基金
Phosphodiesterase 4 and Pulmonary Endothelial Barrier Function
磷酸二酯酶 4 和肺内皮屏障功能
- 批准号:
8833317 - 财政年份:2001
- 资助金额:
$ 2.6万 - 项目类别:
Phosphodiesterase 4 and Pulmonary Endothelial Barrier Function
磷酸二酯酶 4 和肺内皮屏障功能
- 批准号:
8653980 - 财政年份:2001
- 资助金额:
$ 2.6万 - 项目类别:
Phosphodiesterase 4 and Pulmonary Endothelial Barrier Function
磷酸二酯酶 4 和肺内皮屏障功能
- 批准号:
8293867 - 财政年份:2001
- 资助金额:
$ 2.6万 - 项目类别:
Phosphodiesterase 4 and Pulmonary Endothelial Barrier Function
磷酸二酯酶 4 和肺内皮屏障功能
- 批准号:
8469550 - 财政年份:2001
- 资助金额:
$ 2.6万 - 项目类别:
CHARACTERIZATION OF M AERUGINOSA PLASMIDS FOR USE AS CLONING VECTORS
用作克隆载体的铜绿质粒的表征
- 批准号:
5211809 - 财政年份:
- 资助金额:
$ 2.6万 - 项目类别: