CORE--VECTOR
核心--向量
基本信息
- 批准号:6110308
- 负责人:
- 金额:$ 27.1万
- 依托单位:
- 依托单位国家:美国
- 项目类别:
- 财政年份:1999
- 资助国家:美国
- 起止时间:1999-04-01 至 2000-03-31
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
The Vector Core will play an integral and essential role in all
subprojects. The primary mission of the Vector Core will to provide well
characterized, high titer rAAV for the subprojects in this Program. Each
virus preparation will be purified by CsCl centrifugation and will be
titered by a method (infectious center assay) that will allow comparison
to other stocks regardless of the transgene or promoters used. In
addition, quality control assays will be performed to assess the
particle to infectivity ratio, general purity and the levels of wild-
type AAV contamination and adenovirus contamination. This will involve
the use of dot blot and/or PCR assays for particles, SDS-PAGE analysis
of the stocks, as well as infectious center and plaque assays. The
second goal of the Vector Core will be to develop new production methods
for rAAV. Based on the discovery of the heparan sulfate proteoglycan as
the AAV cell surface receptor, the core will focus on the use of heparan
sulfate affinity column chromatography in the purification method. In
addition, the Vector Core will further investigate the wild-type AAV
helper functions in the development of better helpers to increase
packaging efficiency of rAAV. Finally, the Vector Core will provide
support in the construction of various vectors as needed by the
subprojects of this Program. In particular, the Core will construct and
test a series of CFTR minigenes under the control of selected
constitutive promoters.
向量核心将在所有人中发挥不可或缺而重要的作用
子标题。向量核心的主要任务将提供良好的
该程序中的子标志表征了高滴度RAAV。每个
病毒制备将通过CSCL离心纯化,将是
用方法(感染中心测定)替代,该方法将允许比较
对于其他股票,无论使用的转基因或启动子如何。在
此外,将进行质量控制测定法以评估
粒子与感染比,一般纯度和野生水平
型AAV污染和腺病毒污染。这将涉及
SDS-PAGE分析的使用点印迹和/或PCR分析用于颗粒
股票,传染中心和斑块测定法。这
向量核心的第二个目标是开发新的生产方法
对于拉夫。基于发现乙par硫酸盐蛋白聚糖作为
AAV细胞表面受体,核心将重点放在乙酰肝素的使用上
纯化方法中的硫酸盐亲和力色谱柱色谱法。在
此外,向量核心将进一步研究野生型AAV
助手在开发更好的助手的发展中起作用
拉夫的包装效率。最后,向量核心将提供
根据需要支持各种向量的支持
该程序的子项目。特别是,核心将构建和
在选定的控制下测试一系列CFTR微型元素
构成启动子。
项目成果
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专著数量(0)
科研奖励数量(0)
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专利数量(0)
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