マクロファージ担持微粒子を用いた生体材料の免疫学的評価法の開発

使用巨噬细胞支持的微粒开发生物材料的免疫学评价方法

基本信息

批准号：
22KJ1206
负责人：
戸田翔太
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究ではマクロファージの分極を指標としたin vitroにおけるバイオマテリアルの免疫学的評価法の確立を目指しており、マクロファージを微粒子に担持させることで細胞特性が変化していないマクロファージを調製できると考えていた。本年度では微粒子に担持させたマクロファージの細胞特性を評価した上で、バイオマテリアルの炎症性評価を行なった。旋回培養によって微粒子に担持されたマクロファージは一般的な静置培養で作製したマクロファージと比較して抗炎症型のM2遺伝子の発現量が高いことがわかった。バイオマテリアルの炎症性評価のため、マクロファージ担持微粒子を材料上に播種した結果、マクロファージは微粒子に留まり、材料側に移動しないことが観察された。マクロファージが微粒子上に留まることで材料に接着しないため、材料の炎症性評価の実施が困難だった。そのため、微粒子を使用しない方針に変更した。微粒子を用いずに旋回培養したTHP-1はマクロファージに分化し、凝集体を形成した。マクロファージ担持微粒子と同様にマクロファージ凝集体はM2遺伝子が強発現していた。旋回速度の検討により、旋回培養時の培地の流れがM2遺伝子を強発現に寄与することが示唆された。またマクロファージ凝集体を培養基材表面に播種すると、凝集体を中心として同心円状にマクロファージが広がって接着することが観察された。凝集体マクロファージはM2遺伝子が強発現を強発現していたが、材料表面に接着するため、炎症性評価ができると考えている。

在本研究中，我们旨在建立一种以巨噬细胞极化为指标的生物材料的体外免疫学评价方法，我们相信通过在微粒中支持巨噬细胞，可以制备出细胞特性不变的巨噬细胞。今年，我们评估了微粒支持的巨噬细胞的细胞特征，然后评估了生物材料的炎症特性。结果发现，与一般静态培养制备的巨噬细胞相比，通过旋转培养在微粒上支持的巨噬细胞具有更高的抗炎M2基因表达水平。当将巨噬细胞支持的微粒接种到材料上以评估生物材料的炎症特性时，观察到巨噬细胞保留在微粒上并且没有向材料迁移。由于巨噬细胞保留在颗粒上并且不粘附在材料上，因此很难评估材料的炎症特性。因此，我们改变了政策，不使用细颗粒。不使用微粒通过旋转培养的THP-1分化为巨噬细胞并形成聚集体。与巨噬细胞支持的微粒类似，M2 基因在巨噬细胞聚集体中强烈表达。对旋转速度的检查表明，旋转培养期间培养基的流动有助于M2基因的强烈表达。此外，当将巨噬细胞聚集体接种到培养基表面上时，观察到巨噬细胞在聚集体周围同心扩展并粘附在其上。聚集的巨噬细胞强烈表达M2基因，但由于它们粘附在材料表面，我们相信它们可以用于炎症评估。