薬剤性腎障害発現におけるアポトーシスの役割に関する研究

细胞凋亡在药物性肾损伤中作用的研究

基本信息

批准号：
09877435
负责人：
乾賢一
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

薬剤性腎障害における尿細管細胞死は、これまで、ネクローシス(壊死)と考えられてきた。一方、アポトーシスは、プログラムによる自発的細胞死であり、個体の恒常性維持や生体防御のために必須の機能であると考えられる。そこで、近位尿細管に特有の性質を保持しているブタ腎由来培養上皮細胞LLC-PK_1を用い、腎障害性薬物による障害発現におけるアポトーシス誘導とその役割に関する検討を行った。1.LLC-PK_1細胞のシスプラチン障害におけるアポトーシス誘導とその役割:コンフルエントに達したLLC-PK_1細胞を30μMシスプラチンで処理したところ、24時間後、既にヌクレオソーム単位ごとのDNA断片化及び核クロマチン凝集が認められ、アポトーシスの誘導されていることが明らかとなった。さらに、同条件で培養を継続したところ、培養液中へのLDH遊離、並びに細胞ホモジネート中の頂側膜酵素活性の低下が認められ、障害の発現が確認された。さらに、シスプラチンとグルタチオンとの同時処理を行ったところ、細胞障害及びアポトーシス誘導は共に抑制された。したがって、シスプラチンによるアポトーシス誘導は、細胞障害発現と関連することが示唆された。一方、高濃度(1mM)のシスプラチンでLLC-PK_1細胞を処理したところ、12時間以内に障害の発現が認められたが、DNA断片化及び核クロマチンの凝集は認められなかったことから、高濃度シスプラチン処理における障害発現はネクローシスによることが推察された。2.他の腎障害性薬物によるアポトーシス誘導:他の腎障害性薬物であるゲンタマイシン、シクロスポリンAで24時間処理した場合にも、DNA断片化が認められたことから、種々の薬剤性腎障害の発現にアポトーシスの関与する可能性が示唆された。

药物性肾损伤中的肾小管细胞死亡被认为是坏死。另一方面，细胞凋亡是一种程序性自发细胞死亡，被认为是维持个体稳态和生物防御的重要功能。因此，我们使用猪肾来源的培养上皮细胞 LLC-PK_1 研究了细胞凋亡的诱导及其在肾毒性药物引起的损伤发展中的作用，该细胞保留了近端肾小管特有的特性。 1.LLC-PK_1细胞中的细胞凋亡诱导及其在顺铂损伤中的作用：当用30μM顺铂处理汇合的LLC-PK_1细胞时，24小时后已观察到每个核小体单元中的DNA断裂和核染色质聚集。诱导细胞凋亡。此外，当在相同条件下继续培养时，观察到LDH释放到培养基中以及细胞匀浆中顶膜酶活性的降低，证实了疾病的发展。此外，同时用顺铂和谷胱甘肽治疗可抑制细胞损伤和细胞凋亡诱导。因此，提示顺铂诱导细胞凋亡与细胞损伤的表达有关。另一方面，当LLC-PK_1细胞用高浓度(1mM)顺铂处理时，在12小时内观察到损伤，但未观察到DNA断裂和核染色质聚集，推测是顺铂处理引起的损伤。是由于坏死。 2.其他肾毒性药物诱导细胞凋亡：用其他肾毒性药物庆大霉素和环孢素A处理24小时后仍观察到DNA断裂，提示细胞凋亡可能参与表达。