歯周疾患病原細菌に対して選択的な抗菌活性を示す唾液蛋白に関する研究

对引起牙周病的细菌表现出选择性抗菌活性的唾液蛋白的研究

• 批准号: 09877446
• 负责人: 内藤 幸雄
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Suzuka National College of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877446/
• 关键词: ラット; シスタチンS; シスタチンスーパーファミリー; 顎下腺; 歯周病; システィン蛋白分解酵素; 生物防御; システィン蛋白分解酵素阻害タンパク質; 生体防御; 蛋白分解酵素阻害タンパク質

シスタチンSはシスティンプロテアーゼに対する阻害括性を持つ。植物由来のパパインをラットの口腔内に投与すると、このタンパクが誘導される。この事象は外来(食物、細菌)プロテアーゼによる障害(炎症)に対する防御機構の一つであると考えている。一方、歯周病の原因細菌の一種であるPorphyromonas gingivalisの一連の変異株(381,381P,W50,W83,VPI14018,ATCC 33277,NCTC1 1834)に対して選択的かつ殺菌的な抗菌活性を示す。しかし、高度に精製された標品中の微量成分が抗菌活性の本体である可能性を否定できない。シスタチンSまたは微量成分が歯周病の治療薬となりうる可能性を追求することが、本研究の目的である。交感神経β-受容体作動薬であるイソプロテレノールを連続投与したラット顎下腺唾液を大量に採取した。試料をSephadex G-75カラムによるゲルクロマトグラフィーによってG-I、G-IIとG-IIIに分画した。抗菌活性は画分G-IIとG-IIIに認められた。シスタチンSが分離される画分G-IIはDEAE-sepharose 6Bによるion chromatographyとCM-papain agaroseによるaffinity chromatographyによって精製した。単離したシスタチンSは抗菌活性を示した。そのアミノ酸配列データに基づいて、複数のペプチドを合成し、その抗菌活性を評価した結果、シスタチンSと同程度の活性は認められた。より効果的な誘導体の合成が今後の課題である。G-IIIには複数の低分子量ペプチドが存在した。この物質の抗菌活性はシスタチンSよりも数段高いことが認められた。抗菌活性ペプチドの特定が今後の課題である。

Cystatin S 对半胱氨酸蛋白酶具有抑制特性。当将植物来源的木瓜蛋白酶注入大鼠口腔时，会诱导这种蛋白质。该事件被认为是针对外来（食物、细菌）蛋白酶引起的损伤（炎症）的防御机制之一。另一方面，它对牙龈卟啉单胞菌（一种牙周病致病菌）的一系列突变菌株（381,381P、W50、W83、VPI14018、ATCC 33277、NCTC1 1834）表现出选择性和杀菌性抗菌活性。然而，不可否认的是，高纯度样品中的微量成分可能与抗菌活性有关。本研究的目的是探讨胱抑素S或其微量成分作为牙周病治疗剂的可能性。从持续给予交感β-受体激动剂异丙肾上腺素的大鼠中收集大量下颌下腺唾液。使用 Sephadex G-75 柱通过凝胶色谱将样品分级为 G-I、G-II 和 G-III。在级分 G-II 和 G-III 中观察到抗菌活性。通过使用DEAE-琼脂糖6B的离子色谱法和使用CM-木瓜蛋白酶琼脂糖的亲和色谱法纯化其中分离了半胱氨酸蛋白酶抑制剂S的级分G-II。分离的胱抑素S表现出抗菌活性。根据氨基酸序列数据，合成了多种肽并评估了它们的抗菌活性，结果发现它们具有与胱抑素S相当的活性。未来的挑战是合成更有效的衍生物。 G-III 中存在多种低分子量肽。发现该物质的抗菌活性比胱抑素S高几个数量级。未来的挑战是鉴定抗菌活性肽。

项目成果

鶴崎美徳、梅本俊彦、内藤幸雄: "抗菌性唾液蛋白に関する研究"第4回高専シンポジウム要旨集. 4. 95 (1999)

Noriyuki Tsurusaki、Toshihiko Umemoto、Yukio Naito：“抗菌唾液蛋白的研究”第四届国立工业大学研讨会摘要（1999 年）。

鶴崎美徳、梅本俊彦、内藤幸雄: "抗菌性唾液蛋白に関する研究" 第4回高専シンポジウム要旨集. 4. 95 (1999)

Noriyuki Tsurusaki、Toshihiko Umemoto、Yukio Naito：“抗菌唾液蛋白的研究”第四届国立工业大学研讨会摘要（1999 年）。

出口貴宏、内田尚孝、川村真貴子、内藤幸雄: "シスタチンSの生体防御機構"第5回高専シンポジウム要旨集. 5. 118 (2000)

Takahiro Deguchi，Naotaka Uchida，Makiko Kawamura，Yukio Naito：“胱抑素S的生物防御机制”第五届国立工业大学研讨会摘要。5. 118（2000）。