合成致死性を用いた新しいがん治療法の検討~変異に応じた個別療法の確立を目指して~

利用合成致死性检验新的癌症治疗方法〜旨在根据突变建立个体化治疗〜

• 批准号: 22K09956
• 负责人: 藤兼 亮輔
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Fukuoka Dental College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09956/
• 关键词: 細胞死; ミスマッチ修復; DNA複製ストレス; DNA損傷応答; DNA修復; 合成致死

DNA修復経路異常との合成致死をスクリーニングを試みるため、レンチウイルスを用いたCRISPRライブラリーの調製の準備を行なった。これと並行して、DNA修復異常でアルキル化剤に高感受性を示す遺伝子の候補を調べたところ、FANCD2を同定した。子宮頸がん細胞株でFANCD2をCRISPR/Cas9法でノックアウトすると、FANCD2欠損細胞は野生株と比べてミスマッチ修復に依存した細胞死が促進しており、野生株と比べてアルキル化剤に高感受性を示すことがわかった。FANCD2はDNA損傷に起因する複製ストレスに応答するタンパク質で、DNA修復経路の一つであるファンコニ経路の重要な因子である。FANCD2がアルキル化損傷応答にどのように関与するか調べるため、FANCD2の細胞内局在を調べたところ、アルキル化損傷依存してミスマッチ修復複合体と共局在することがわかり、ミスマッチ複合体によって引き起こされるDNA複製ストレスを処理していると予想された。ファンコニ経路はさまざまなDNA損傷に対する応答に関与するため、合成致死の新規のターゲットとなると考えられる。

为了筛选与 DNA 修复途径异常相关的合成致死性，我们使用慢病毒制备了 CRISPR 文库。与此同时，我们研究了由于 DNA 修复缺陷而对烷化剂表现出高敏感性的候选基因，并鉴定了 FANCD2。当在宫颈癌细胞系中使用 CRISPR/Cas9 敲除 FANCD2 时，与野生型细胞相比，FANCD2 缺陷细胞表现出加速的错配修复依赖性细胞死亡，并且比野生型细胞对烷化剂更敏感。那FANCD2是一种对DNA损伤引起的复制应激做出反应的蛋白质，是DNA修复途径之一范可尼途径的重要因子。为了研究 FANCD2 如何参与烷基化损伤反应，我们研究了 FANCD2 的亚细胞定位，发现它以烷基化损伤依赖性方式与错配修复复合物共定位，预测细胞正在处理诱导的 DNA 复制。压力。由于 Fanconi 途径参与对多种 DNA 损伤的反应，因此它可能代表合成致死的新靶标。

项目成果

アルキル化損傷応答におけるミスマッチ修復因子PMS1の機能.

错配修复因子 PMS1 在烷基化损伤反应中的作用。

• 发表时间: 2022
• 作者: 藤兼亮輔; 上地有香; 森田祥; 得居果乃; 日高真純
• 通讯作者: 日高真純

アルキル化損傷応答におけるFANCD2の役割

FANCD2 在烷基化损伤反应中的作用

• 发表时间: 2022
• 作者: 森田祥; 藤兼亮輔; 上地有香; 松浦尚志; 日高真純
• 通讯作者: 日高真純