Study of the role of desmosome cadherin in cell motility and lymph node metastasis

桥粒钙粘蛋白在细胞运动和淋巴结转移中的作用研究

基本信息

批准号：
22K09921
负责人：
稲井哲一朗
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Fukuoka Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

本研究は、アドヘレンス結合蛋白E-cadherin (Ecad)、デスモソーム蛋白Desmoglein (DSG) 1、DSG3の発現の組合せに着目し、口腔扁平上皮癌(OSCC)で集団運動が起こっている可能性と上皮層内部で起こる初期変化を調べることを目的とする。令和４年度は、DSG1およびDSG3をゲノム編集により、遺伝子破壊した安定細胞株をマウスケラチノサイト(K38)で作成すること、OSCC患者の生検試料を収集することが当初の計画であった。令和４年度は、DSG3遺伝子をゲノム編集で破壊したK38細胞株DSG3KO、さらにEGFPを発現するEGFP-DSG3KOを作製した。Ca添加による細胞接着形成過程で、DSG1の細胞接着部位への集積がDSG3KOではWT（野生型K38）に比べ遅延することがわかった。細胞接着形成後の接着強度をDissociation assayで調べると、DSG3KOはWTより接着強度が減弱し、１日後より３日後でさらに接着強度が弱まることが分かった。DSG3とp38 MAPKとの関連が報告されており、今回の結果がp38 MAPKの活性化と関連があるか来年度は調べる。また、K38はDSG1, DSG2, DSG3が発現しており、デスモソーム形成において、同種のDSGによるホモ結合か異種のDSGによるヘテロ結合かは明らかでない。WTとEGFP-DSG3KOを混合培養して、異種細胞間結合 (WTとEGFP-DSG3KOの間の結合)を免疫染色で調べた。その結果、DSG1, DSG2はすべての異種細胞間結合にみられたが、DSG3は異種細胞間結合には一部を除いてみられなかった。この結果から、DSG3の大部分はDSG3同氏のホモ結合で接着していると考えられた。これらの結果を総合すると、DSG3の欠失は、デスモソーム形成を遅延し、細胞間結合を弱めることがわかった。

本研究重点关注粘附结合蛋白E-钙粘蛋白（Ecad）、桥粒蛋白桥粒糖蛋白（DSG）1和DSG3的表达组合，探讨口腔鳞状细胞癌（OSCC）和上皮层发生集体运动的可能性目的是调查内部发生的最初变化。 2020财年，最初的计划是在小鼠角质形成细胞（K38）中创建稳定的细胞系，其中DSG1和DSG3通过基因组编辑被基因破坏，并收集OSCC患者的活检样本。 2020财年，我们创建了K38细胞系DSG3KO（其中DSG3基因通过基因组编辑被破坏）和EGFP-DSG3KO（表达EGFP）。在由于 Ca 添加而导致的细胞粘附形成过程中，我们发现与 WT（野生型 K38）相比，DSG3KO 中 DSG1 在细胞粘附位点的积累被延迟。当通过解离测定检测细胞粘附形成后的粘附强度时，发现DSG3KO的粘附强度弱于WT，且3天后的粘附强度比1天后进一步减弱。 DSG3 和 p38 MAPK 之间的关系已被报道，明年我们将研究目前的结果是否与 p38 MAPK 的激活有关。此外，DSG1、DSG2和DSG3在K38中表达，目前尚不清楚K38在桥粒形成过程中是与相同类型的DSG纯合还是与不同类型的DSG杂合。进行WT和EGFP-DSG3KO的混合培养，并通过免疫染色检查不同类型细胞之间的结合(WT和EGFP-DSG3KO之间的结合)。结果，在所有异源细胞连接处均发现了DSG1和DSG2，但除少数外，所有异源细胞连接处均未发现DSG3。根据该结果，认为大部分DSG3通过DSG3的纯合键连接。总而言之，这些结果表明 DSG3 的缺失延迟了桥粒形成并削弱了细胞与细胞的连接。