象牙芽・エナメル芽細胞標識マウスの象牙質及びエナメル質形成不全の構造と遺伝子解析

成牙本质细胞/成釉细胞标记小鼠牙本质和牙釉质发育不全的结构和遗传分析

基本信息

  • 批准号:
    22K09901
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.66万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    2022
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2022-04-01 至 2025-03-31
  • 项目状态:
    未结题

项目摘要

我々は象牙芽細胞及びエナメル芽細胞を別々の蛍光で標識し、象牙芽細胞やエナメル芽細胞を単離、同定するために象牙芽細胞特異的遺伝子dentin sialophosphoprotein及びエナメル芽細胞特異的遺伝Amelogenin-Xの遺伝子座に蛍光タンパクを挿入した遺伝子組換えマウスを作製した。これらのマウスは象牙芽細胞及びエナメル芽細胞を別々の蛍光で標識できることに加え 、象牙質形成不全やエナメル質形成不全を示した。そこで、象牙芽細胞やエナメル芽細胞がこれらの疾患にどのように関わり、どのような遺伝子発現変化や性状変化を示すか、組織切片、micro-CT、走査型電子顕微鏡やRamanレーザー顕微鏡等を用いて象牙質の構造変化について検討した。[1] マイクロCT、走査型電子顕微鏡、Ramanレーザー顕微鏡等を用いてAMELX欠損、DSPP欠損、両欠損したマウスのエナメル質及び象牙質の硬度や性状解析を行ない、特にDSPP欠損マウスの象牙質で基質の変化が起きていることがわかった。[2]上記の3種類のマウスのエナメル質および象牙質の硬度変化が修復象牙質によるか、骨様組織によるか或はエナメルmatrix分泌異常によるかを明らかにする為に蛍光標識された象牙芽細胞と象牙質をDSPP, DMP, OPN, BSP, AMBN等の抗体を用いて組織学的に検討し、その違いを明らかにした。[3]上記3種類のマウスの象牙質の硬度変化が発生時の象牙芽細胞やエナメル芽細胞の遺伝子発現変化に起因するかを調べるために、歯髄を単離し、リアルタイムPCR法にて硬組織関連遺伝子、dentin matrix、enamel matrixタンパク関連遺伝子の発現を検討し、違いを明らかにした。[4] Tamoxifen投与にて象牙芽細胞特異的にCreを発現できるマウスとCre-LoxPによりジフテリア毒素受容体(DTR)遺伝子を発現誘導できるマウスを用いて象牙芽細胞を消失させた際の2次象牙質誘導の有無と象牙質の硬さについてマイクロCT 解析及び凍結切片を用いた解析を開始した。
我们用单独的荧光标记成牙本质细胞和成釉细胞,并使用成牙本质细胞特异性基因牙本质唾液酸磷蛋白和成釉细胞特异性基因Amelogenin-X来分离和鉴定成牙本质细胞和成釉细胞,其中将荧光蛋白插入到基因位点中。 。除了能够用单独的荧光标记成牙质细胞和成釉细胞之外,这些小鼠还表现出牙本质发生和牙釉质发育不全。因此,我们利用组织切片、显微CT、扫描电子显微镜、拉曼激光显微镜等来研究成牙本质细胞和成釉细胞如何参与这些疾病,以及它们表现出的基因表达和特性的结构变化。牙本质。 [1] 利用显微CT、扫描电子显微镜、拉曼激光显微镜等,我们分析了AMELX缺乏症、DSPP缺乏症小鼠的牙釉质和牙本质的硬度和性质,发现这两种小鼠的牙釉质和牙本质都发生了变化。底物正在发生。 [2] 利用荧光标记的牙本质芽,对上述三类小鼠的牙釉质和牙本质硬度的变化是否是由于牙本质修复、骨样组织或牙釉质基质分泌异常所致,进行组织学检查。使用 DSPP、DMP、OPN、BSP 和 AMBN 等抗体,并澄清了差异。 [3] 为了研究上述三种小鼠牙本质硬度的变化是否是由于成牙本质细胞和成釉细胞在发育过程中基因表达的变化所致,我们分离了牙髓并使用实时PCR测量了硬组织。检查了相关基因、牙本质基质和牙釉质基质蛋白相关基因的表达,并阐明了差异。 [4]使用他莫昔芬可在成牙本质细胞中特异性表达Cre的小鼠和可通过Cre-LoxP诱导白喉毒素受体(DTR)基因表达的小鼠消除成牙本质细胞时的次要影响我们已开始分析是否存在。使用显微 CT 分析和冰冻切片评估牙本质诱导和牙本质硬度。

项目成果

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专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
ホームページ 三重大学 基礎医学系講座 幹細胞発生学
主页 三重大学基础医学部干细胞胚胎学
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
修復象牙質形成における象牙芽細胞の役割
成牙本质细胞在修复性牙本质形成中的作用
  • DOI:
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    松山加乃;磯野加奈;山崎英俊
  • 通讯作者:
    山崎英俊
The role of isolated CD35+ follicular dendritic cells in the differentiation from B cells to IgA+ GL7+ cells.
分离的 CD35 滤泡树突状细胞在 B 细胞分化为 IgA GL7 细胞中的作用。
  • DOI:
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Mari Hikosaka
  • 通讯作者:
    Mari Hikosaka
Amelx-tdTomato 及びDspp-GFP ノックインマウスを用いたエナメル芽細胞及び象牙芽細胞の同定と表現型解析
使用 Amelx-tdTomato 和 Dspp-GFP 敲入小鼠对成釉细胞和成牙本质细胞进行鉴定和表型分析
  • DOI:
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    山崎英俊
  • 通讯作者:
    山崎英俊
Isolation of CD35+ follicular dendritic cells and its role in the differentiation from B cells to IgA+GL7+ cells
CD35滤泡树突状细胞的分离及其在B细胞向IgA GL7细胞分化中的作用
  • DOI:
    10.1016/j.imlet.2022.02.005
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    4.4
  • 作者:
    Hikosaka
  • 通讯作者:
    Hikosaka
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