ヒトiPS細胞由来気道上皮細胞移植における生着効率向上因子の探索

寻找提高人 iPS 细胞来源的气道上皮细胞移植植入效率的因素

• 批准号: 22K09666
• 负责人: 桑田 文彦
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09666/
• 关键词: 気管; ヒトiPS細胞; 線毛上皮細胞; トランスクリプトーム; 免疫不全ラット; 気道上皮; 移植; トランスクリプトーム解析

気管は呼気の通り道として重要であり、その管腔面を覆う気道上皮は呼気中の異物を排出する機能を担っているため、障害されると易感染性となり、時として生命にかかわる。申請者らはヒトiPS細胞由来気道上皮細胞移植治療による気管欠損部の早期上皮化を目指し、免疫不全ラットへの移植モデルを確立しているが、生着効率は低く実験ごとのばらつきも大きいため、改善が必要である。本研究では、我々が既に確立しているhiPSC由来気道上皮移植免疫不全ラットにつき一般的な移植条件を再検討することでI.移植効率の高い移植条件を検討し、その移植条件を用いて作製した移植モデルのII.移植部組織を採取し、遺伝子発現解析により、移植細胞生着に関与するホストとレシピエント双方の遺伝子群の選定をおこない、III.解析結果から想定される移植効率向上因子の調節による生着効率向上法の確立を目指す。今年度はヒト由来転写産物が検出されるよう、移植細胞の分化ステージの検討やヒトiPS細胞由来気道上皮細胞シートで被覆した人工気管の移植における術式など移植法の改善を行った上で、移植部位からのRNA抽出を複数回行い、解析に必要な量と品質が保たれるような移植部位のサイズ、組織保管法、回収法などの検討を行った。確定した条件で採取された組織からRNA抽出後、RNAの品質評価を行い、トランスクリプトーム解析を行った。またコントロールとして細胞なしの移植部組織、ヒト由来の移植細胞からもRNA抽出を行い、トランスクリプトーム解析に必要な量の検討を行った。

气管作为呼出气体的重要通道，覆盖其管腔表面的气道上皮具有排出呼出气体中异物的功能，因此如果受损，就容易受到感染，有时甚至会危及生命。申请人旨在利用人iPS细胞来源的气道上皮细胞移植疗法实现气管缺损的早期上皮化，并建立了免疫缺陷大鼠的移植模型，但移植效率较低且实验间差异较大，有待改进。 。在本研究中，我们重新检查了免疫缺陷大鼠中 hiPSC 来源的气道上皮移植的一般移植条件 II 收集移植模型的移植组织并使用基因表达分析来选择两种基因组。 III.我们的目标是建立一种通过调整移植细胞存活率来提高移植效率的方法。今年，为了检测人类来源的转录本，我们将检查移植细胞的分化阶段并改进移植方法，包括移植覆盖有人类iPS细胞来源的气道上皮细胞片的人工气管的手术程序。从移植部位多次提取RNA，并对移植部位的大小、组织保存方法、采集方法等进行研究，以保持分析所需的数量和质量。从在既定条件下收集的组织中提取 RNA 后，评估 RNA 质量并进行转录组分析。另外，作为对照，从无细胞的移植组织和人源移植细胞中提取RNA，并检查转录组分析所需的量。