ES細胞を用いたヒルシュスプルング病の病態解明および治療戦略構築のための基盤研究

阐明先天性巨结肠的病理学并开发使用 ES 细胞的治疗策略的基础研究

基本信息

批准号：
22K08721
负责人：
藤原なほ
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Juntendo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

本研究では、新規ES細胞を樹立することで未だ解明されていない腸管神経系の発生メカニズムの解析をもとにH病の病態解明を行い、さらには新しい治療リソースとして革新的な細胞治療方法の臨床応用に展開するための基礎研究を行う。SOX10-VENUSマウスから新規ES細胞を樹立し、これを用いて基礎的なENS発生過程を経時的に観察、腸管神経幹細胞の誘導を行う。さらに、同細胞を用いた移植実験を予定する。同時にSOX10-VENUSマウスから作成した神経塊を用いてH病腸管部位の細胞環境の解析を行うことで、神経発達促進因子を探索し、幹細胞移植後の生着・発達を促進する物質をその後の移植実験でも検証することが可能となる。今年度は、新規ES細胞の作成と腸管神経幹細胞への分化誘導方法確立に取り組んだ。新規に樹立したSV-mES細胞から胚様体を作成し、特定のサイトカイン・増殖因子（bFGF, EGF）を含む無血清培地にて培養開始し、ハンギングドロップ法でEB細胞を作製。3日目からSOX10発現が蛍光顕微鏡下で確認可能となった。これを浮遊培養に移行し、神経細胞塊としてDual Smad Inhibition法で効率的に分化誘導を行う。細胞免疫染色とリアルタイムRT-PCRを用いて分化の判定を行う予定である。

在这项研究中，我们将通过建立新的ES细胞并分析尚不清楚的肠神经系统的发育机制来阐明H病的病理学，并且还将开发创新的细胞治疗方法作为新的治疗资源进行基础。临床应用研究。我们将从 SOX10-VENUS 小鼠中建立新的 ES 细胞，并用它们来观察基本 ENS 随着时间的推移的发育过程并诱导肠神经干细胞。此外，计划使用相同的细胞进行移植实验。同时，通过使用SOX10-VENUS小鼠产生的神经块分析H病肠道内的细胞环境，我们将寻找促进神经发育的因素，并鉴定促进干细胞移植后植入和发育的物质。也可以通过移植实验来验证这一点。今年，我们致力于创造新的ES细胞，并建立诱导分化为肠神经干细胞的方法。胚状体由新建立的 SV-mES 细胞产生，在含有特定细胞因子和生长因子（bFGF、EGF）的无血清培养基中培养，并使用悬滴法产生 EB 细胞。从第 3 天开始，SOX10 表达在荧光显微镜下变得可见。将其转移到悬浮培养物中，并使用双重 Smad 抑制方法有效诱导分化为神经元团。我们计划使用细胞免疫染色和实时 RT-PCR 来确定分化。

项目成果

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专著数量（0）

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专利数量（0）

Differentiation of enteric neural crest cells transplanted from SOX10-Venus mouse embryonic stem cells into the gut of the endothelin receptor B null mouse model

SOX10-Venus小鼠胚胎干细胞移植至内皮素受体B缺失小鼠模型肠道内的肠神经嵴细胞的分化

DOI：
10.1007/s00383-022-05318-5
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
1.8
作者：
Fujiwara N; Miyahara K; Nakazawa
通讯作者：
Nakazawa

Increased enteric neural crest cell differentiation after transplantation into aganglionic mouse gut

移植到无神经节小鼠肠道后肠神经嵴细胞分化增加

DOI：
10.1007/s00383-022-05324-7
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
1.8
作者：
Nakazawa
通讯作者：
Nakazawa

In vitro共培養モデルを用いたマウス腸管神経幹細胞の発生過程の検証

利用体外共培养模型验证小鼠肠神经干细胞的发育过程

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
藤原なほ;宮原克;田中奈々;山高篤行
通讯作者：
山高篤行

High intestinal vascular permeability in a murine model for Hirschsprung’s disease: implications for postoperative Hirschsprung-associated enterocolitis

先天性巨结肠小鼠模型中的高肠道血管通透性：对术后先天性巨结肠相关小肠结肠炎的影响

DOI：
10.1007/s00383-022-05308-7
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
1.8
作者：
Suda Kazuto;Yamada Shunsuke;Miyahara Katsumi;Fujiwara Naho;Kosaka Seitaro;Abe Kumpei;Seo Shogo;Nakamura Shinji;Lane Geoffrey J.;Yamataka Atsuyuki
通讯作者：
Yamataka Atsuyuki

IN-VITRO TRANSPLANTATION OF ENTERIC NEURAL CREST CELLS FROM SOX10-VENUS MOUSE EMBRYONIC STEM CELLS IN THE GUT OF THE ENDOTHELIN RECEPTOR B NULL MOUSE MODEL.

内皮素受体 B 空鼠模型肠道中 SOX10-VENUS 小鼠胚胎干细胞的肠神经嵴细胞的体外移植。