ヒトES/IPS細胞を用いた副腎皮質・血管分化機構の解明および内分泌学的解析

使用人 ES/IPS 细胞阐明肾上腺皮质/血管分化机制和内分泌分析

基本信息

批准号：
22K08651
负责人：
田浦大輔
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08651/
关键词：
ヒトiPS細胞副腎皮質細胞副腎発生 iPS細胞

项目摘要

当該年度は研究計画に従い、ヒトiPS細胞からの副腎皮質細胞分化誘導研究において、副腎不全モデルマウスへの移植実験を実施した。副腎不全モデルマウス作製においては、マウスには副副腎が複数存在し、これらの摘出も必要であることから、福岡大学医学部　再生・移植医学講座との共同研究を開始し、副腎不全モデルマウスの作製に成功した。ヒトiPS細胞由来中間中胚葉細胞にSF-1をウイルスベクターにて導入した細胞、導入前の細胞、双方を腎被膜に移植し、細胞塊がどのように変化するかを観察するとともに、生存率、血清コルチコステロン濃度を測定した。今後さらに移植施行回数を増やし、解析結果をまとめる必要がある。また、in vitroでの検証では、ヒトiPS細胞由来中間中胚葉細胞にSF-1を遺伝子導入することでどのような変化が生じているかをRNAseq解析にて確認した。SF-1導入にて変動した遺伝子の中で特に一つの遺伝子に着目し、この遺伝子に関して強制発現させるためのベクターも構築した。これまで、副腎皮質細胞分化およびステロイド合成においてマスター因子と考えられるSF-1を遺伝子導入することで分化誘導実験を行ってきたが、内因性にSF-1発現を上昇させる、SF-1非導入の分化誘導系についても検討を開始している。ヒトiPS細胞からの血管細胞分化誘導研究に関しては、その派生研究として、ニコチン添加による血管細胞分化への影響の検討を行い、その後、ニコチン性アセチルコリン受容体が未分化状態のES/iPS細胞に発現していることから、未分化ES/iPS細胞へのニコチン添加の影響に関して検討し、この成果につき論文化した。

按照研究计划，本财年，我们开展了肾上腺皮质功能不全模型小鼠的移植实验，进行人iPS细胞诱导肾上腺皮质细胞分化的研究。在肾上腺功能不全模型小鼠的制作中，由于小鼠具有多个肾上腺，必须将这些腺体切除，因此我们开始与福冈大学医学院再生移植医学系共同研究，致力于制作肾上腺功能不全模型小鼠成功了。将使用病毒载体导入SF-1的源自人iPS细胞的中间中胚层细胞和导入前的细胞均移植到肾被膜中，以观察细胞量的变化并评估存活率，并测量血清皮质酮浓度。未来需要增加移植数量并汇总分析结果。此外，在体外验证中，我们使用RNAseq分析来确认当SF-1被引入人iPS细胞来源的中间中胚层细胞时发生了哪些变化。我们特别关注由于SF-1的引入而改变的基因中的一个基因，并构建了用于强制表达该基因的载体。到目前为止，已经通过基因转移SF-1进行了分化诱导实验，SF-1被认为是肾上腺皮质细胞分化和类固醇合成的主要因素，我们也开始研究分化诱导系统。关于从人iPS细胞诱导血管细胞分化的研究，作为衍生研究，我们研究了尼古丁添加对血管细胞分化的影响，然后研究了未分化的ES/iPS细胞中烟碱乙酰胆碱受体的表达，因此，我们进行了研究。研究人员研究了添加尼古丁对未分化 ES/iPS 细胞的影响，并就此结果发表了一篇论文。