Therapeutic strategies for connective tissue diseases by targeting the autophagy-lysosomal pathway

针对自噬-溶酶体途径的结缔组织疾病治疗策略

• 批准号: 22K08567
• 负责人: 吉見 竜介
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08567/
• 关键词: オートファジー; リソソーム; TRIM; 膠原病

膠原病疾患の主因は自己免疫反応による炎症であると推測されるが，その発症機序は不明である．TRIMファミリータンパクのひとつであるTRIM21は膠原病疾患でみられるI型インターフェロンの過剰産生やB細胞の分化亢進に対して抑制作用をもつ．そこで本研究では，膠原病疾患における①オートファジー関連分子の発現プロファイル，② オートファジー活性化とTRIMファミリー発現量の関連，③ TRIM21によるオートファジー制御の分子機構，の3点を調べ，TRIMファミリーによるオートファジー制御作用の膠原病病態での役割を解明するとともに，④ オートファジー制御薬による病態の変化を調べることによって，オートファジー制御薬の膠原病治療への応用の可能性を検討している．その成果は，膠原病病態の知見にオートファジーという新たな視点を生むだけでなく，オートファジーを治療標的とする新規薬剤の開発の足掛かりとなることも期待される．まず，オートファジー活性化とTRIMファミリー発現量の関連を調べるために，ヒト単球系細胞株THP-1に発現ベクターやsiRNAを導入してTRIMファミリーの発現を変化させ，蛍光免疫染色法によってLC3の輝点数を，ウェスタンブロット法によってLC3-Ⅱ量をそれぞれ測定し，オートファジー活性の変化を調べ，実験系を構築した．現在，全身性エリテマトーデス，シェーグレン症候群，全身性強皮症，皮膚筋炎の各疾患においてオートファジー関連分子の発現を網羅的に調べるために，各疾患および健常コントールの各5名ずつより得られた血液検体より単球，CD4+ T細胞，CD8+ T細胞，B細胞を magnetic cell sorting 法で分離し，各血球細胞よりcDNAを作成しているところである．

胶原病的主要原因被认为是自身免疫反应引起的炎症，但其发病机制尚不清楚。 TRIM21 是 TRIM 家族的成员，对胶原蛋白疾病中观察到的 I 型干扰素过度产生和 B 细胞过度分化具有抑制作用。因此，在本研究中，我们研究了胶原病中的三点：（1）自噬相关分子的表达谱，（2）自噬激活与TRIM家族表达水平的关系，以及（3）自噬调节的分子机制TRIM21 除了阐明自噬调节在胶原蛋白疾病病理学中的作用外，通过研究自噬控制药物引起的病理状况的变化，我们正在探讨将自噬控制药物应用于胶原病治疗的可能性。这些结果不仅有望为理解胶原蛋白疾病病理学提供自噬的新视角，而且可以作为开发以自噬为治疗靶点的新药的垫脚石。首先，为了研究自噬激活与TRIM家族表达水平之间的关系，我们将表达载体或siRNA引入人单核细胞系THP-1中以改变TRIM家族的表达，然后使用荧光免疫染色测量LC3的表达我们通过Western blotting测定了亮点的数量和LC3-II的量，研究了自噬活性的变化，并建立了实验体系。目前，为了全面研究系统性红斑狼疮、干燥综合征、系统性硬化症和皮肌炎中自噬相关分子的表达情况，我们目前正在收集每种疾病的 5 名患者和 5 名健康对照者的血液样本，CD4+ T 细胞。使用磁性细胞分选方法从样本中分离出 CD8+ T 细胞和 B 细胞，并从每个血细胞中生成 cDNA。