難治性サイトメガロウイルス感染症に対するiPS細胞由来遺伝子改変T細胞療法の開発

开发 iPS 细胞衍生的基因修饰 T 细胞疗法治疗难治性巨细胞病毒感染

• 批准号: 22K08488
• 负责人: 川瀬 孝和
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Fujita Health University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08488/
• 关键词: サイトメガロウイルス; T細胞受容体; T細胞療法; iPS細胞; 再生キラーT細胞

本研究では、移植後の難治性ウイルス感染症の中で最も頻度の高いサイトメガロウイルス(CMV)を対象とし、iPS細胞から誘導し大量に作成することが可能なキラーT細胞に、本研究にて新たに同定するものを含む種々のCMV抗原特異的TCRを遺伝子導入し、iPS細胞由来遺伝子改変キラーT細胞を作成する。多数作成したT細胞のうち、効果的に感染細胞を排除しGVHDを惹起しない細胞を選出すること目的とする。本年はまず、日本人が高頻度に保有するHLA-A*02:01, A*02:06, A*24:02に拘束性のCMV特異的TCRをクローニングすることに注力した。標的とするタンパクとしては、pp65 を用いた。サイトメガロウイルス既感染者の末梢血単核細胞からCMV抗原特異的テトラマーを用いて、CMV特異的T細胞を濃縮したのち、単一CMV特異的T細胞をフローサイトメトリーを用いて単離した。この細胞を用いてサイトメガロウイルス特異的T細胞受容体遺伝子配列の解析を行なった。計10人のドナーのT細胞を解析し多数のサイトメガロウイルス特異的T細胞受容体をクローニングした。クローニングしたTCRの有効性と安全性を評価するため、TCRの抗原親和性を測定するレポーターアッセイの系を確立し順次評価を行なっている。

在这项研究中，我们针对移植后最常见的难治性病毒感染——巨细胞病毒（CMV），开发了可从 iPS 细胞诱导并大量生产的杀伤性 T 细胞，通过基因导入各种 CMV 抗原特异性 TCR，包括。那些新发现的，用于创建 iPS 细胞衍生的转基因杀伤性 T 细胞。本研究的目的是从已产生的大量T细胞中筛选出能有效消除感染细胞且不诱导GVHD的细胞。今年，我们首先重点克隆仅限于日本人经常携带的 HLA-A*02:01、A*02:06 和 A*24:02 的 CMV 特异性 TCR。 pp65用作目标蛋白。使用 CMV 抗原特异性四聚体从先前感染巨细胞病毒的个体的外周血单核细胞中富集 CMV 特异性 T 细胞后，使用流式细胞术分离单个 CMV 特异性 T 细胞。使用这些细胞，我们分析了巨细胞病毒特异性 T 细胞受体基因序列。我们分析了总共 10 名捐赠者的 T 细胞，并克隆了许多巨细胞病毒特异性 T 细胞受体。为了评估克隆TCR的有效性和安全性，我们建立了报告测定系统来测量TCR的抗原亲和力，并正在进行序贯评估。