HBV HBxを標的とした創薬の多角的アプローチ： cccDNA排除を目指して

针对 HBV HBx 的药物发现的多方面方法：旨在消除 cccDNA

• 批准号: 22K07980
• 负责人: 山下 篤哉
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: University of Yamanashi
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07980/
• 关键词: HBV; HBx; cccDNA; 抗ウイルス化合物

HBV蛋白質の一つHBxはcccDNAの安定化と維持に必須である。本研究では、cccDNAの維持に関与しているHBxの以下の3つの過程①転写制御過程、②タンパク分解過程、③cccDNA制御過程の3つの部位を標的とし、多角的なアプローチでHBV cccDNA排除可能な化合物の探索をおこなっている。まず、①転写制御過程については、HBx はEnhancer I-X promoterによって発現が制御される。そこで、Enhancer I-X promoter転写活性をLuciferase活性で測定出来るレポーター細胞（Enhancer I-X promoter Luc細胞）を作製し、Enhancer I-X promoter転写活性を抑制し、抗HBV活性を有する化合物の同定を試みた。）スクリーニングソースとして、FDA-approved drug library（1470化合物）を用いてスクリーニングを行った。その結果、Enhancer I-X promoter活性を抑制する22化合物を見出した。これらのヒット化合物について、Enhancer I-X promoter抑制活性の詳細な解析及びHepG2.2.15.7細胞を用いた抗HBV活性を検討した結果、Cariprazin(抗精神病薬)、Aripiprazole(抗精神病薬)、Vorapaxar(抗血栓薬)、及びFosaprepitant dimeglumine(制吐薬)の4種のヒット化合物を得た。更に、これら化合物の抗HBV活性をHepG2 -hNTCP-C4細胞及びPXBマウスから分離された新鮮ヒト肝細胞PXB細胞を用いて確認したところHBV感染抑制活性が見られた。また、Hep38.7 tet細胞を用いて、cccDNA産生抑制活性評価したところ、いずれの化合物も細胞内cccDNA量を有意に減少させた。

HBx 是一种 HBV 蛋白，对于稳定和维持 cccDNA 至关重要。在本研究中，我们针对HBx参与cccDNA维持的以下三个过程：（1）转录控制过程、（2）蛋白水解过程和（3）cccDNA控制过程，采用多方面的方法消除HBV我们正在寻找化合物。首先，关于(1)转录控制过程，HBx的表达受Enhancer I-X启动子控制。因此，我们创建了可以通过荧光素酶活性测量Enhancer I-X启动子转录活性的报告细胞（Enhancer I-X启动子Luc细胞），并试图鉴定抑制Enhancer I-X启动子转录活性并具有抗HBV活性的化合物。 ) 使用 FDA 批准的药物库（1470 种化合物）作为筛选来源进行筛选。结果，我们发现了 22 种抑制增强子 I-X 启动子活性的化合物。通过对Enhancer I-X启动子抑制活性的详细分析以及使用HepG2.2.15.7细胞的抗HBV活性研究，我们发现这些命中化合物是卡利拉嗪（抗精神病药）、阿立哌唑（抗精神病药）、沃拉帕沙（获得四种命中化合物：福沙匹坦二葡胺（止吐药）和福沙匹坦二葡胺（止吐药）。此外，当使用 HepG2-hNTCP-C4 细胞和从 PXB 小鼠分离的新鲜人肝细胞 PXB 细胞证实这些化合物的抗 HBV 活性时，观察到 HBV 感染抑制活性。此外，当使用Hep38.7 tet细胞评估cccDNA产生抑制活性时，所有化合物均显着减少细胞内cccDNA的量。

项目成果

Novel Neplanocin A Derivatives as Selective Inhibitors of Hepatitis B Virus with a Unique Mechanism of Action

新型 Neplanocin A 衍生物作为乙型肝炎病毒的选择性抑制剂，具有独特的作用机制

• DOI: 10.1128/aac.02073-21
• 发表时间: 2022
• 影响因子: 4.9
• 作者: Masaaki Toyama; Koichi Watashi; Masanori Ikeda; Atsuya Yamashita; Mika Okamoto; Kohji Moriishi; Masamichi Muramatsu; Takaji Wakita; Ashoke Sharon; Masanori Baba
• 通讯作者: Masanori Baba

HBV Enhancer I-X promoterをターゲットとした抗HBV化合物の探索

寻找针对 HBV 增强子 I-X 启动子的抗 HBV 化合物

• 发表时间: 2022
• 作者: 山下篤哉; 葛西宏威; 田中智久; 大津直樹; 赤池康範; 前川伸哉; 榎本信幸; 森石恆司
• 通讯作者: 森石恆司

HBV Enhancer I-X promoterをターゲットとした抗HBV化合物の同定とその抑制機序

靶向HBV增强子I-X启动子的抗HBV化合物的鉴定及其抑制机制

• 发表时间: 2022
• 作者: 山下篤哉;葛西宏威;田中智久;大津直樹;赤池康範;森石恆司
• 通讯作者: 森石恆司