免疫ブースト効果によるがんの放射線治療効果向上の試み

尝试通过免疫增强作用提高癌症放射治疗的效果

• 批准号: 22K07767
• 负责人: 渡部 明彦
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: University of Toyama
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07767/
• 关键词: バキュロウイルス; ネオ抗原; 放射線; がん免疫; 放射線治療; 免疫誘導; ブースター; 組換えウイルス

組換えバキュロウイルスの入手に関しては、共同研究先の金沢大学のワクチン応用免疫研究室から分与して頂く予定であったが、保存組換え体が失活してしまったため分与が難しくなった。そこで、外注することとし、組換えバキュロウイルスの設計を行い、現在、組換えウイルス構築について打ち合わせ中である。研究の中心となる組換えウイルスの利用がままならないため、大きな実績はまだないが、いくつかの進捗について言及したい。まず組み換えバキュロの設計であるが、まだ最終決定ではないが、EF1プロモーター下にルシフェラーゼ遺伝子を配置して、下流側にSV40のPolyA部位を導入した遺伝子カセットをゲノム中に導入した組換えバキュロウイルスを構築してもらおうと考えている。現在、打ち合わせ中で、構造が決定したらすぐに構築を開始して貰う予定である。Luc発現細胞を構築、単離をおこなった。ハイグロマイシン耐性遺伝子を発現するルシフェラーゼ発現ベクターを購入し、マウスのがん細胞であるRenca細胞と4T1細胞に遺伝子導入をおこなった。Geneticin存在下で培養し、それぞれの細胞株でコロニーを形成する5クロンを単離増殖した後に、ルシフェラーゼアッセイおよびウエスタンブロッティングで発現量を評価した。Renca細胞では、特に多く発現するクロン（他のものと比較して数百倍の発現量のもの）を取得した。また4T1細胞では取得した10クロンで発現量に大きな差はなかった。それぞれの取得クロンで増殖を比較したが、大きな違いはなかった。実験では今回得られた細胞を利用する予定である。

关于重组杆状病毒的获取，原本计划从合作的金泽大学疫苗应用免疫学实验室进行分发，但由于保存的重组病毒已经失活，分发变得困难。因此，我们决定将工作外包，设计了重组杆状病毒，目前正在讨论重组病毒的构建。尽管由于缺乏作为研究核心的重组病毒，目前还没有取得任何重大成果，但我想提一下一些进展。首先，重组杆状病毒的设计尚未最终确定，但我们已经创建了一种重组杆状病毒，其中在EF1启动子下引入了包含荧光素酶基因的基因盒，并且我正在考虑将SV40 PolyA位点引入到基因组中。建造它。目前我们正在讨论，计划结构确定后立即开始施工。构建并分离表达 Luc 的细胞。我们购买了表达潮霉素抗性基因的荧光素酶表达载体，并将该基因导入小鼠癌细胞、Renca细胞和4T1细胞中。在遗传霉素存在下培养并分离并增殖每个细胞系中形成集落的5个克隆后，通过荧光素酶测定和蛋白质印迹评估表达水平。在Renca细胞中，我们获得了一个表达特别高的克隆（表达量比其他克隆高数百倍）。此外，在4T1细胞中，获得的10个克隆之间的表达水平没有显着差异。我们比较了每个获得的克隆的生长情况，但没有显着差异。我们计划将这次获得的细胞用于实验。