不死化したヒト脱落乳歯歯髄幹細胞の培養上清による実験的自己免疫性神経炎の治療効果

永生化人乳牙牙髓干细胞培养上清对实验性自身免疫性神经炎的治疗作用

• 批准号: 22K07504
• 负责人: 宮川 聡美
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Tokyo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07504/
• 关键词: ヒト脱落乳歯歯髄幹細胞; 培養上清; 実験的自己免疫性神経炎

2022年度は、実験的自己免疫性神経炎(EAN)モデルにおける不死化ヒト脱落乳歯歯髄幹細胞の培養上清（SHED-CM）の治療効果について検討を行った。① EANモデルマウスでの治療効果：末梢神経ミエリン蛋白0（P0）180-189ペプチドをCFAと共に1習慣開けて2度免疫し、百日咳毒素を静注し、神経炎を発症させ、臨床スコアーがピークの15日目から2日に1回不死化SHED-CMおよびそのコントロール培地を200 μlずつ複数回腹腔内投与したところ、SHED-CM投与により有意に臨床スコアーの軽減が認められた。さらに、トレッドミルを用いて運動機能を測定すると、運動機能の改善が見られる傾向にあった。1ヶ月後に、坐骨神経のウエスタンブロット解析により、ミエリン塩基性蛋白質（MBP）の発現上昇や、電子顕微鏡解析により神経軸索のミエリンの厚みやその数の増加、さらに、坐骨神経でシュワン細胞の脱分化に重要な転写因子c-Jun発現の低下と逆にシュワン細胞の分化に重要な転写因子Egr2発現の増強が見られた。② SHED-CMのサイトカイン網羅解析：SHED-CM中のサイトカイン量を抗体アレイを用いて網羅的に定量すると、上位にHepatocyte growth factor（HGF）が検出された。そこで、EAN免疫開始から23日後の坐骨神経のウエスタンブロット解析により、SHED-CM投与によりHGFの受容体であるc-METのリン酸化の増強が見られた。次に、HGFの抗体を用いてSHED-CMよりHGFを免疫除去したSHEDとそのコントロール抗体で同様に処理したSHED-CMをEANマウスに投与すると、HGFの免疫除去によりSHED-CMのEAN発症抑制効果がキャンセルされる傾向にはあった。そこで、今度はHGFのsiRNAおよびコントロールのsiRNAをSHED細胞に遺伝子導入し、その培養上清を回収して、EANマウスに投与したが、EAN発症の抑制効果のキャンセルは弱かった。現在、他の分子の関与も含めて検討中である。

在2022财年，我们研究了永生化人乳牙牙髓干细胞培养上清液（SHED-CM）在实验性自身免疫性神经炎（EAN）模型中的治疗效果。 ①EAN模型小鼠治疗效果：用CFA免疫周围神经髓磷脂蛋白0(P0)180-189肽两次，静脉注射百日咳毒素，出现神经炎，永生化SHED-CM及其对照培养基一次临床评分达到峰值。从 200 的第 15 天开始每 2 天一次当以微升剂量腹膜内多次给药时，SHED-CM 给药显着降低了临床评分。此外，当使用跑步机测量运动功能时，存在运动功能改善的趋势。一个月后，坐骨神经Western blot分析显示髓磷脂碱性蛋白（MBP）表达增加，电镜分析显示神经轴突髓磷脂厚度和数量增加，以及雪旺细胞变性我们观察到坐骨神经中 c-Jun（一种对分化很重要的转录因子）的表达减少，而 Egr2（一种对雪旺细胞分化很重要的转录因子）的表达增加。 ② SHED-CM的细胞因子综合分析：使用抗体阵列对SHED-CM中细胞因子的量进行综合定量时，在顶部检测到肝细胞生长因子（HGF）。因此，EAN免疫开始23天后坐骨神经的蛋白质印迹分析表明，SHED-CM施用增强了HGF受体c-MET的磷酸化。接下来，当将使用HGF抗体从SHED-CM中免疫去除HGF的SHED和用其对照抗体以相同方式处理的SHED-CM给予EAN小鼠时，HGF的免疫去除抑制了EAN的发展SHED-CM 中存在效应被取消的趋势。因此，这次将HGF siRNA和对照siRNA导入SHED细胞，收集培养上清液并给予EAN小鼠，但对EAN发病的抑制作用被微弱地抵消。我们目前正在研究其他分子的参与。

项目成果

不死化したヒト脱落乳歯歯髄幹細胞（SHED-CM）培養上清の褥瘡モデルマウス皮膚潰瘍に対する治療効果

永生化人乳牙牙髓干细胞（SHED-CM）培养上清液对压疮模型小鼠皮肤溃疡的治疗作用

• 发表时间: 2022
• 作者: 片平泰弘;長谷川英哲;井上槙也;古阪悠馬;坂本絵梨;渡邉有麻;関根碧水;宮川聡美;溝口 出;善本隆之
• 通讯作者: 善本隆之

不死化間葉系幹細胞の上清を含む末梢神経障害治療用医薬組成物、及びその組成物を有効成分とする医薬製剤

含有永生化间充质干细胞上清液的用于治疗周围神经病的药物组合物，以及含有该组合物作为活性成分的药物制剂

• 发表时间: 2022