深海放線菌が産生する新規の胃癌抑制物質の同定

深海放线菌产生的新型胃癌抑制剂的鉴定

• 批准号: 22K07308
• 负责人: 瀬良 知央
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Osaka Metropolitan University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07308/
• 关键词: スキルス胃癌; 放線菌

深海性放線菌からのスキルス胃癌に対する新規治療薬開発を目的として、共同研究者が培養に成功した190種の深海性放線菌ライブラリー中で32種の深海性放線菌の培養上清中にスキルス胃癌を含め胃癌細胞3株以上の増殖抑制作用を示すことを準備試験で確認していた。令和4年度では、さらにそこから検討を重ねることで16種に絞り込み、活性物質の精製法確立を行った。C18固相抽出にてそれぞれの放線菌種に適切な極性を当教室独自のスキルス胃癌細胞株含めた胃癌細胞株3株にて確認。細胞株横断的に再現性を認めることを確認し、さらに既存の放線菌由来抗癌剤であるマイトマイシン、アドリアマイシンも同時に固定抽出を行い、16種の深海性放線菌ライブラリーとは異なる分画での抑制を認めた。これにより16種の放線菌上清の活性物質が既存2種とは異なる新規抗癌活性物質であることが示唆された。また16種の放線菌上清をpHで分けて液液分画を行い、それぞれの放線菌上清のおおよそのpHを推定した。さらにまずは3種の放線菌上清をC18系Preparative HPLCシステムにて分析し、認めたピークを抽出し胃癌細胞株3株にて活性評価を行い、うち1種は癌増殖抑制を呈するピークがほぼ単一になるまで精製するに至った。他2種では胃癌細胞株で増殖抑制は認めず、その理由としてHPLCでの分離解析において200-400nmの波長で実施したが、400nm以降に活性物質が潜んでいる可能性があり、また現状のHPLCでは糖類は抽出できず、薄層クロマトグラフィー等を活用し評価を進めていく。

来自深海放线菌 共同研究人员为开发新的治疗药物而成功培养的 190 种深海放线菌库中，在 32 种深海放线菌的培养物上清液中检测到了松鼠属。用于胃癌。初步试验证实，该药可抑制包括胃癌在内的三种或更多胃癌细胞系的增殖。 2020年度，我们进行了进一步的研究，将其缩小到16种，并建立了活性物质的纯化方法。使用三种胃癌细胞系（包括我们自己的松鼠胃癌细胞系）进行 C18 固相萃取，证实了每种放线菌物种的适当极性。我们确认了跨细胞系的可重复性，并且同时固定和提取了现有的放线菌来源的抗癌药物丝裂霉素和阿霉素，并将它们抑制在来自16种深海放线菌库的不同组分中。这表明16种放线菌上清液中的活性物质是不同于现有两类的新型抗癌活性物质。另外，通过将16种放线菌上清液除以pH来进行液-液分级，并估计各放线菌上清液的大致pH值。此外，我们首先使用基于 C18 的制备型 HPLC 系统分析了三种类型的放线菌上清液，提取了观察到的峰，并评估了它们在三种胃癌细胞系中的活性，并对其进行了精炼，直至成为单一产品。在另外两种胃癌细胞系中，没有观察到生长抑制，其原因是虽然HPLC分离分析是在200-400 nm的波长下进行的，但活性物质可能潜伏在400 nm以上的波长处，并且糖的现状无法用HPLC提取，因此将使用薄层色谱进行评估。