上皮化誘導・DNA修復抑制性短鎖RNAと細胞運命制御による難治性癌治療法の創出

利用短链 RNA 诱导上皮化、抑制 DNA 修复并控制细胞命运，创造治疗顽固性癌症的方法

基本信息

批准号：
22K07290
负责人：
吉川清次
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Doshisha Women's College of Liberal Arts
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

がんの転移・浸潤、化学療法耐性、幹細胞特性に関与する上皮間葉転換における創薬標的の探索を進めている。中でも上皮化誘導、脂肪分化誘導、NUMB遺伝子、代謝標的に注目をして研究を進めている。2022年4月に遺伝子組換え実験室が整備され、EMT/MET dual reporter上で、shP1のMET様効果を確認、doxycycline tamoxifenによる遺伝子発現誘導系が働くことを確認した。細胞周期への上皮化、脂肪分化誘導が及ぼす影響を調べるためlentivirus fucci reporterを各種間葉系がん細胞に導入した。脂肪分化誘導による効果の検証を進め、間葉系乳癌細胞株では、上皮化誘導shRNAによるMETは、rosiglitazoneによる脂肪分化誘導 (CD36発現、BODIPY取込能)を抑えることが判明した。癌幹細胞モデルにおける、EMT前後、Ras遺伝子の有無、2D vs 3D培養条件下でのRNAシークエンスのデータを取得し、京大時代に取得したメタボロームデータと合わせて解析を進め、間葉系細胞ではグルタチオンの蓄積があることを見出した。また癌幹細胞様細胞である、HMLER間葉細胞 (Ras間葉細胞) の3D培養特異的な代謝物を同定した。ソルビトール経路の代謝亢進を間葉細胞で認めたため、Ras間葉細胞に対する効果を期待して、エパルレスタットによアルドースリダクターゼ (AKR1B1) 阻害実験を行なった。既報に反して、EMTや増殖に対する効果は見られなかった。興味深いことに、間葉細胞より上皮細胞に対する増殖抑制効果が認められ、shP1・shH1による上皮化誘導と合成致死効果が得られる可能性がある。

我们正在寻找上皮间质转化的药物靶点，该转化涉及癌症转移/侵袭、化疗耐药和干细胞特性。我们的研究尤其集中于上皮化诱导、脂肪分化诱导、NUMB 基因和代谢目标。 2022年4月成立基因改造实验室，在EMT/MET双报告基因上证实了shP1的MET样作用，并证实多西环素他莫昔芬的基因表达诱导系统发挥作用。为了研究上皮化和脂肪形成分化对细胞周期的影响，将慢病毒fucci报告基因引入各种间充质癌细胞中。我们继续验证诱导脂肪分化的效果，发现在间充质乳腺癌细胞系中，使用上皮化诱导shRNA的MET抑制罗格列酮诱导的脂肪分化（CD36表达、BODIPY摄取能力）。我们获得了 EMT 前后、Ras 基因是否存在以及癌症干细胞模型中 2D 与 3D 培养条件下的 RNA 测序数据，并将它们与我在京都大学期间获得的代谢组数据结合起来进行分析。发现有积累我们还鉴定了 HMLER 间充质细胞（Ras 间充质细胞）3D 培养物特有的代谢物，这些细胞是癌症干细胞样细胞。由于在间充质细胞中观察到山梨醇途径的代谢亢进，因此我们用依帕司他进行了醛糖还原酶（AKR1B1）抑制实验，期望其对Ras间充质细胞的影响。与之前的报告相反，没有观察到对 EMT 或增殖的影响。有趣的是，在上皮细胞而不是间充质细胞上观察到增殖抑制作用，这表明shP1/shH1可能诱导上皮化并具有合成致死作用。

项目成果

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专利数量（0）

Molecular and metabolic target for epithelial-mesenchymal transition in human breast cancer and glioblastoma

人乳腺癌和胶质母细胞瘤上皮间质转化的分子和代谢靶点

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
Kiyotsugu Yoshikawa; Rei Takahashi
通讯作者：
Rei Takahashi

Role of Cancer Stem-like Cells in the Process of Invasion and Mesenchymal Transformation by a Reconstituted Triple-negative Breast Cancer Cell Population Resistant to p53-induced Apoptosis

癌症干细胞样细胞在抗 p53 诱导细胞凋亡的重组三阴性乳腺癌细胞群侵袭和间质转化过程中的作用

DOI：
10.1267/ahc.22-00076
发表时间：
2022-10-28
期刊：
影响因子：
2.4
作者：
Sana Inoue; Miki Imanishi; Ai Kanzaki; Atsumi Fujimoto; Marina Maeyama; Ayaka Okamoto; Hiroka Matsuda; Kiyotsugu Yoshikawa;Rei Takahashi
通讯作者：
Rei Takahashi