ヒト膵管上皮オルガノイドを用いた膵管内乳頭粘液性腫瘍の発癌関連因子探索研究

利用人胰腺导管上皮类器官研究导管内乳头状粘液性肿瘤的癌变相关因素

• 批准号: 22K07271
• 负责人: 松田 暁子
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Yamagata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07271/
• 关键词: 膵癌; IPMN; オルガノイド; Extra cellular vesicles

本研究は、ヒト膵切除検体から作成した膵管上皮organoidにIPMNを特徴づける任意の遺伝子変異を導入した際の形質変化を反映した液性因子を解明する事を目的としている。任意のcDNA配列を組み込んだplasmid DNAを作成し、Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G、Takara Bio）を用いてLenti virus vectorを作成した。KRASG12Dは既存のplasmidであるpBABE-Puro-KRas*G12Vを、GNASR201Hは、TrueORF cDNA Clone（OriGne）で作成したplasmidを用いた。7日～14日間培養したorganoidを回収しsingle cell化し、Matrigel(Corning)にsingle cellと作成したベクターを添加しtransfectionを行っているが、KRASG12Dについては安定した遺伝子導入が可能であった。

本研究的目的是阐明当将具有 IPMN 特征的任意基因突变引入由人胰腺切除标本制备的胰腺导管上皮类器官时，反映表型变化的体液因素。创建了包含任意 cDNA 序列的质粒 DNA，并使用 Lenti-X Packaging Single Shots（VSV-G，Takara Bio）创建了 Lenti 病毒载体。 KRASG12D使用现有的质粒pBABE-Puro-KRas*G12V，GNASR201H使用使用TrueORF cDNA克隆(OriGne)制作的质粒。收集培养7～14天的类器官，转化为单细胞，将单细胞和制作的载体添加到Matrigel(Corning)中进行转染，可以稳定地导入KRASG12D的基因。