Development of a novel anti-gastric cancer drug targeting the Hippo pathway with a thrombin receptor antagonist

使用凝血酶受体拮抗剂开发针对 Hippo 通路的新型抗胃癌药物

• 批准号: 22K07260
• 负责人: 藤本 大裕
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Teikyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2027-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07260/
• 关键词: PAR1; 脱リン酸化; トロンビン; 胃癌; トロンビン受容体; Hippo経路

細胞増殖制御は様々な形で解析が行われたが, 細胞接触や機械的刺激による増殖制御については, まだ不明な点も多い. Hippo 経路はショウジョウバエで発見された接触抑制の鍵となる経路で, ほ乳類にも保存され, 器官のサイズや制御, がん抑制経路として認識されている.Hippo 経路の抑制状態は癌症例で高頻度に認められ, さらに, 上皮間葉転換を誘導し浸潤・転移を高め, 予後の増悪との深い関連が示されており, がん治療において重要な経路となると考えられている. 我々は, ヒト胃癌細胞とトロンビンの関連について研究を続け, トロンビン受容体であるPAR1活性が, Hippo 経路の抑制とそれに伴う浸潤・転移の増悪を示した. そこで，ヒト胃癌細胞でのHippo 経路の下流に位置する転写因子YAP，TAZの不活化とPAR1との関係を詳細に解析し, PAR1拮抗剤でのHippo 経路の制御と期待される効果，およびその効能を適切に評価し，PAR1を介したHippo 経路を標的とする胃がん治療の実現への方策を探求することを目的とした.臨床検体を用いて, PAR1とHippo経路の下流転写因子であるYAPの発現を免疫染色法を用いて評価した. PAR1発現の症例においては、脱リン酸化されたYAPの核内染色発現症例と相関性があることを確認した. また, YAP/TAZ複合体のリン酸化の評価をキナーゼアッセイを用いて行うと, PAR1強発現の胃癌細胞株を低濃度トロンビン添付の培養液にて15分培養後の検体では脱リン酸化が促進されていることが確認できた.今後は, さらにトロンビン刺激における時間条件に伴うYAP/TAZ複合体の脱リン酸化の程度の評価と, YAPの局在の評価を行う予定である.

细胞增殖控制已通过多种方式进行了分析，但关于细胞接触和机械刺激的增殖控制仍存在许多未知数，Hippo途径是在果蝇中发现的接触抑制的关键途径，它在哺乳动物中是保守的。控制器官大小和调节并抑制癌症的途径。Hippo 途径的抑制经常在癌症病例中观察到，它还会诱导上皮-间质转化，导致侵袭和转移增加。它已被证明与预后恶化密切相关，被认为是癌症治疗的重要途径，显示Hippo途径的抑制与侵袭和转移的加剧有关，因此，我们详细分析了PAR1之间的关系。以及位于人胃癌细胞中 Hippo 通路下游的转录因子 YAP 和 TAZ 的失活。本研究的目的是利用临床标本，适当评估 PAR1 拮抗剂对 Hippo 通路的调节、预期效果及其功效，并探索实现针对 PAR1 介导的 Hippo 通路的胃癌治疗的策略。使用免疫染色评估了 PAR1 和 YAP（Hippo 通路的下游转录因子）的表达。在PAR1表达的情况下，我们确认了与去磷酸化YAP的核染色的情况存在相关性，此外，当使用激酶测定评估YAP/TAZ复合物的磷酸化时，我们能够确认去磷酸化在其中被促进。在含有低浓度凝血酶的培养液中培养强表达PAR1的胃癌细胞系15分钟后的样本。此外，我们计划根据凝血酶刺激期间的时间条件评估 YAP/TAZ 复合物的去磷酸化程度和 YAP 的定位。