細胞系譜特異的ながん細胞増殖を制御する長鎖ノンコーディングRNAの機能解析

控制细胞谱系特异性癌细胞增殖的长非编码RNA的功能分析

基本信息

批准号：
22K07148
负责人：
加藤真一郎
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

メラノサイト細胞系譜の発生・分化・生存に必須の転写因子MITFによる細胞系譜特異的な増殖機構（lineage dependency）の本態解明に向けて、メラノサイト細胞系譜特異的なロングノーコンディングRNA（long non-coding RNA: lncRNA）の同定と機能解析を基軸とした研究を遂行した。特に、MITFによって直接転写制御される18種類のlncRNAのうち、新規性が高く、メラノサイトやメラノーマの生存・増殖においてロバストな機能を持つ「lncRNA X」に着目し、その未知なる分子的特性や細胞内局在の詳細な解析を行なった（lncRNA Xは霊長類でのみ発現が確認されている）。近年、lncRNAに含まれるORFから生理活性ペプチドが翻訳されることが様々な生物種で報告されているが、FLAGタグを付加したlncRNA Xを用いた分子生物学的解析や質量分析解析により、lncRNA Xの推定ORFは翻訳されることなくlncRNAのまま機能すると考えられた。さらに、lncRNA Xの細胞内局在についてRNA FISHによる検討を行なったところ、細胞周期依存的に細胞内局在が変化するという興味深い現象が観察された。また、RNA-seqおよび質量分析解析を用いた網羅的な遺伝子・タンパク質発現解析により、lncRNA Xのノックダウンによって細胞周期のG2/M transitionに関連する転写因子AやキナーゼBの発現が有意に低下していたことから、lncRNA Xは細胞周期依存的にその局在を変化させ、直接的・間接的にメラノサイト細胞系譜の細胞周期を制御することが示唆された。以上のことから、MITFによるメラノサイト細胞系譜のlineage dependencyの一端には、lncRNA XによるG2/M細胞周期制御が必要となることが明らかとなった。

为了阐明对黑素细胞谱系的发育、分化和存活至关重要的转录因子 MITF 谱系依赖性的真实本质，我们开发了黑素细胞谱系特异性的长非编码 RNA。 lncRNA的鉴定和功能分析。特别是，在MITF直接转录调控的18种lncRNA中，我们重点关注了lncRNA X，它是高度新颖的，并且在黑色素细胞和黑色素瘤的存活和增殖中具有强大的功能，我们对其内部进行了详细的分析。定位（lncRNA X已被证实仅在灵长类动物中表达）。近年来，有报道称，在多个物种中，生物活性肽是从lncRNA中包含的ORF翻译而来的。X的假定ORF被认为在不被翻译的情况下发挥着lncRNA的作用。此外，当我们通过RNA FISH研究lncRNA X的细胞内定位时，我们观察到一个有趣的现象，即细胞内定位以细胞周期依赖性方式发生变化。此外，使用RNA-seq和质谱分析进行的全面基因和蛋白质表达分析表明，lncRNA X的敲低显着降低了参与细胞周期G2/M转变的转录因子A和激酶B的表达。结果表明，lncRNA X 以细胞周期依赖性方式改变其定位，并直接或间接控制黑素细胞谱系的细胞周期。由上可知，MITF对黑素细胞谱系的部分谱系依赖性需要lncRNA X对G2/M细胞周期的控制。