CRISPR screen to identify novel molecular mechanisms of HIV-1 latency

CRISPR 筛选鉴定 HIV-1 潜伏期的新分子机制

• 批准号: 22K07085
• 负责人: 白川 康太郎
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07085/
• 关键词: HIV; 潜伏感染; shock and kill; 潜伏感染再活性化薬; HIV感染症根治療法; HIV感染症; CRISPRスクリーン

二重蛍光レポーターHIVGKOを感染させたJurkat T細胞からmKO陽性の潜伏感染細胞モデル(JGL)を用いてCRISPRスクリーニングを行い、ノックアウトによりHIV転写の活性化を示す４遺伝子を同定した。JGL細胞およびGFPレポーターをもつJ-Lat細胞株6.3, 8.4, 11.1および5A8をもちいてこれらの遺伝子のノックアウトによりHIV転写が活性化することを確認した。この際、ウエスタンブロットでGagの発現を確認できた。さらにTet-on shRNAを用いてこれらの遺伝子のノックダウンが同様にHIV転写を活性化することを示した。また、これらの遺伝子に関連する化合物を培地に添加することでJGLおよびJ-LatのHIV転写の活性化が誘導され、新たなメカニズムの潜伏感染再活性化薬として作用することを発見し研究を継続している。

我们使用来自感染双荧光报告基因 HIVGKO 的 Jurkat T 细胞的 mKO 阳性潜伏感染细胞模型 (JGL) 进行 CRISPR 筛选，并鉴定出四个通过敲除显示出 HIV 转录激活的基因。使用携带 GFP 报告基因的 JGL 细胞和 J-Lat 细胞系 6.3、8.4、11.1 和 5A8，我们证实敲除这些基因会激活 HIV 转录。此时，通过Western blotting证实了Gag的表达。此外，使用 Tet-on shRNA，我们发现这些基因的敲低同样会激活 HIV 转录。此外，我们发现在培养基中添加与这些基因相关的化合物会诱导JGL和J-Lat中HIV转录的激活，这作为潜伏感染再激活药物的新机制仍在继续。