Analysis of innate immune response of alveolar macrophages and epithelial-mesenchymal transition of alveolar epithelial cells

肺泡巨噬细胞的先天免疫反应和肺泡上皮细胞的上皮间质转化分析

基本信息

批准号：
22K06698
负责人：
高野幹久
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

肺胞内には様々な免疫応答システムが存在し，特にマクロファージは重要な役割を担っている。本研究では，肺胞マクロファージの自然免疫応答について，バクテリア由来ペプチドの細胞内取り込みに関わるペプチドトランスポーターPEPT2との関係を中心に解析することを第一の目的とした。また，バクテリアの感染による炎症は間質性肺炎や肺線維症へと進行する危険性があり，その過程には肺胞上皮細胞の上皮間葉転換が関与する可能性がある。そこで肺胞マクロファージから分泌される液性因子と肺胞上皮細胞の上皮間葉転換の関係について解析することを第2の目的とした。令和4年度の成果は以下のとおりである。1）ラット肺胞マクロファージを用いた検討ラット肺から単離した肺胞マクロファージにおいてPEPT2のmRNA発現を確認した。またWestern blottingによりPEPT2タンパク質の発現も確認した。さらに，PEPT2基質である蛍光標識ペプチドβ-Ala-Lys-AMCA を用い，β-Ala-Lys-AMCA取り込みのpH依存性やPEPT2阻害剤による取り込み阻害効果から，肺胞マクロファージにおいてPEPT2が機能していることを見出した。２）ラット肺胞マクロファージ由来培養細胞NR8383を用いた検討実験動物数を抑えるため，次にNR8383細胞を用いて同様の検討を進めた。その結果，NR8383細胞においてもPEPT2のmRNAおよびタンパク質が発現していること，β-Ala-Lys-AMCAのNR8383細胞内への取り込みはPEPT2を介することを明らかにするとともに取り込み特性の解析を進めた。従って，NR8383細胞は，肺胞マクロファージにおけるPEPT2の発現・機能解析に有用な培養細胞と考えられた。

肺泡内存在各种免疫反应系统，其中巨噬细胞尤其发挥重要作用。本研究的主要目的是分析肺泡巨噬细胞的先天免疫反应，重点关注与参与细胞内细菌肽摄取的肽转运蛋白 PEPT2 的关系。此外，细菌感染引起的炎症有进展为间质性肺炎和肺纤维化的风险，这一过程可能涉及肺泡上皮细胞的上皮间质转化。因此，我们的第二个目标是分析肺泡巨噬细胞分泌的体液因子与肺泡上皮细胞上皮间质转化之间的关系。 2020 财年的结果如下。 1) 使用大鼠肺泡巨噬细胞进行的研究在从大鼠肺部分离的肺泡巨噬细胞中证实了 PEPT2 mRNA 的表达。 PEPT2蛋白的表达也通过Western blotting得到证实。此外，使用荧光标记肽β-Ala-Lys-AMCA（PEPT2底物），我们基于β-Ala-Lys-AMCA摄取的pH依赖性和PEPT2的摄取抑制作用证明了PEPT2在肺泡巨噬细胞中发挥作用。我发现有抑制剂。 2) 使用大鼠肺泡巨噬细胞来源的培养细胞NR8383进行研究为了减少实验动物的数量，我们接下来使用NR8383细胞进行了类似的研究。结果，我们发现PEPT2 mRNA和蛋白质在NR8383细胞中表达，并且NR8383细胞摄取β-Ala-Lys-AMCA是由PEPT2介导的，并且我们继续分析摄取特性。因此，NR8383细胞被认为是分析肺泡巨噬细胞中PEPT2表达和功能的有用培养细胞。