昆虫脂肪体幹細胞の連続培養及びオルガノイド形成技術の開発

昆虫脂肪体干细胞连续培养及类器官形成技术开发

基本信息

批准号：
22K05677
负责人：
小林淳
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K05677/
关键词：
昆虫培養細胞スフェロイドオルガノイド脂肪体幹細胞

项目摘要

１. 脂肪体の特性を有する細胞集団の構成細胞の分離培養と特性解析カイコ胚子の初代培養から得られた脂肪体の特性を有する増殖分化細胞集団BoMo-Siam BのRNA-seq解析により，脂肪体で特異的に発現する体液タンパク質（promoting protein，low molecular 30 kDa lipoprotein PBMHP-6 precursorなど）や生体防御タンパク質（attacin precursorなど）の遺伝子が，卵巣由来のBmN4細胞よりも顕著に多く発現していることが確認され，分離培養やスフェロイドあるいはオルガノイド形成に伴う遺伝子発現特性変化を評価するための比較対照基準が得られた。また，BoMo-Siam Bから小型の浮遊性細胞の分離培養に成功し，凝集体（スフェロイド）形成能力とBmNPV感受性を有することを明らかにした。さらに，細胞内に形成される顆粒は，蛍光色素LipiDyeIIを取り込んで明瞭な蛍光を発することから，脂肪を蓄積していることが示唆された。２. 脂肪体オルガノイド形成技術の開発と特性解析BoMo-Siam Bのスフェロイドを5 μmセルストレイナーを用いて除去し，ほぼシングルセル状態からのスフェロイド形成を試みたところ，徐々に細胞の集塊が形成されるものの，細胞の初期密度を増やしてもスフェロイド形成効率に顕著な改善は認められなかった．さらに，哺乳類のオルガノイド形成に用いられているPamCellおよびVitro Gelの2種類の3次元培養法を用いて，BoMo-Siam Bのシングルセル状態からのスフェロイド形成を試みたが，改善は認められなかった。

1.具有脂肪体特征的细胞群组成细胞的分离、培养和表征对从蚕胚胎原代培养中获得的具有脂肪体特征的增殖分化细胞群BoMo-Siam B进行RNA-seq分析，结果表明脂肪液体内特异表达的蛋白质（促进蛋白、低分子30kDa脂蛋白PBMHP-6前体等）和生物防御蛋白（attacin证实前体（前体等）等基因的表达显着高于卵巢来源的BmN4细胞，为评估与分离培养和球状体或类器官形成相关的基因表达特征的变化提供了比较标准。我们还成功地从BoMo-Siam B中分离和培养了小型浮游细胞，并证明它们具有形成聚集体（球体）的能力并且对BmNPV敏感。此外，细胞内形成的颗粒掺入了荧光染料LipiDyeII，并发出清晰的荧光，表明它们正在积累脂肪。 2.脂肪体类器官形成技术的开发和表征使用5μm细胞滤网去除BoMo-Siam B球体，并尝试从几乎单细胞状态形成球体，但逐渐形成细胞团块，但没有。即使初始细胞密度增加，球体形成效率也显着提高。此外，我们尝试使用两种用于形成哺乳动物类器官的 3D 培养方法（PamCell 和 Vitro Gel）从 BoMo-Siam B 的单细胞状态形成球状体，但没有观察到任何改进。