免疫寛容を回避した特異体質薬物毒性の高感度予測基盤の構築

构建高灵敏度的特异性药物毒性预测平台，避免免疫耐受

• 批准号: 17J03861
• 负责人: 薄田 健史
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017-04-26 至 2019-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17J03861/
• 关键词: HLA; 特異体質薬物毒性; 免疫毒性; 免疫寛容; T細胞; 動物モデル; PD-1; 毒性評価モデル

前年度までに、ヒト-マウスキメラ型HLA遺伝子(HLA-B*57:01)を導入したトランスジェニックマウス(B*57:01-Tg)から寛容系の免疫応答の代表格とされるPD-1受容体を排除した動物モデル(B*57:01-Tg/pd-1-/-)を新規に作出し、特異体質薬物毒性 (IDT)が鋭敏に評価可能となる系を確立できることを期待していた。しかしながら、Cardoneらが続報で「抗PD-1抗体処置によりPD-1を除去したB*57:01-Tgにおいてもアバカビル(ABC)によるIDTの鋭敏な評価が可能とならない」と報告したことから (J Clin Invest., 2018)、B*57:01-Tg/pd-1-/-用いることの必要性が図らずも否定されてしまった。そこで今年度は、他の免疫寛容系として制御性CD4+ T細胞に着目し、抗CD4抗体処置によりCD4+ T細胞を除去したB*57:01-Tgを用いた毒性試験を実施した。1%ABCを含む混餌をB*57:01-Tgに3週間経口投与し、かつ3日毎にABCを耳介に塗布した各マウスより単離したリンパ節では、CD8+メモリーT細胞（CD44highCD62Llow）の割合が野生型同腹子（LM）と比較して有意に増加しており、CD4+ T細胞除去条件ではさらに顕著に増加した。加えて、CD4+ T細胞除去B*57:01-Tgでは両耳において顕著な発赤が観察され、真皮組織中への炎症性リンパ球の浸潤やCD8+ T細胞の集積も同時に認められた。一方で、肝臓においてはCD8+ T細胞の集積が組織学的所見として認められたものの、血清ALT値は正常であり、肝障害は認めなかった。以上より、B*57:01-TgのCD4+ T細胞を除去することでABCによる皮膚特異的なIDTの再現が可能となることが示唆された。

直到去年，我们已经开发出将人鼠嵌合HLA基因（HLA-B*57:01）导入PD-的转基因小鼠（B*57:01-Tg），这是代表性的PD-。我们创建了一种新的动物模型（B*57:01-Tg/pd-1-/-），其中 1 个受体被消除，并研究了特殊药物毒性。我们期望能够建立一个能够对（IDT）进行敏感评估的系统。然而，正如 Cardone 等人在后续报告中报道的那样，“即使在通过抗 PD-1 抗体治疗去除 PD-1 的 B*57:01-Tg 中，阿巴卡韦对 IDT 的敏感评估也如此” ）是不可能的。”（J Clin Invest.，2018），使用 B*57:01-Tg/pd-1-/- 的必要性被意外地否定了。因此，今年，我们重点关注作为另一种免疫耐受系统的调节性CD4+ T细胞，并使用B*57:01-Tg进行了毒性测试，其中通过抗CD4抗体处理去除CD4+ T细胞。在连续3周口服含有1% ABC至B*57:01-Tg的饮食并每3天将ABC涂在耳廓上的每只小鼠分离的淋巴结中，CD8+记忆T细胞（CD44highCD62Llow）增加。与野生型同窝小鼠 (LM) 相比，该比例显着增加，并且在 CD4+ T 细胞耗尽的条件下增加得更显着。此外，CD4+T细胞耗尽的B*57:01-Tg的双耳均观察到明显发红，同时观察到炎症淋巴细胞浸润至真皮组织和CD8+T细胞积聚。另一方面，虽然在组织学上观察到CD8+T细胞在肝脏中积聚，但血清ALT水平正常并且没有观察到肝损伤。上述结果表明，通过删除B*57:01-Tg CD4+ T细胞，可以重现由ABC引起的皮肤特异性IDT。

项目成果

Usefulness of chimeric HLA transgenic mice for the evaluation of immune-mediated idiosyncratic drug toxicity

嵌合 HLA 转基因小鼠在评估免疫介导的特异质药物毒性中的用途

• 发表时间: 2018
• 作者: Takeshi Susukida

キメラ型HLA遺伝子導入マウスを用いた免疫の関与する特異体質薬物毒性評価モデルの確立

嵌合HLA转基因小鼠免疫相关特异质药物毒性评价模型的建立

• 发表时间: 2018
• 作者: 薄田 健史; 青木 重樹; 宋 彬彬; 藤森 惣大; 伊藤 晃成
• 通讯作者: 伊藤 晃成

キメラ型HLA遺伝子導入マウスを用いた高感度な特異体質薬物皮膚毒性評価モデル

嵌合HLA转基因小鼠高灵敏异质药物皮肤毒性评价模型

• 发表时间: 2019
• 作者: 薄田 健史;青木 重樹; 伊藤 晃成
• 通讯作者: 伊藤 晃成

HLA遺伝子導入マウス由来細胞を用いた特異体質薬物毒性メカニズムの解析

利用 HLA 转基因小鼠细胞分析特殊药物毒性机制

• 发表时间: 2017
• 作者: 藤森惣大;宋彬彬;薄田健史;青木重樹;伊藤晃成
• 通讯作者: 伊藤晃成

Evaluation of immune-mediated idiosyncratic drug toxicity using chimeric HLA transgenic mice

使用嵌合 HLA 转基因小鼠评价免疫介导的特殊药物毒性

• DOI: 10.1007/s00204-017-2112-9
• 发表时间: 2017
• 影响因子: 6.1
• 作者: Susukida Takeshi;Aoki Shigeki;Kogo Kotaro;Fujimori Sota;Song Binbin;Liu Cong;Sekine Shuichi;Ito Kousei
• 通讯作者: Ito Kousei