膜タンパク質に基づいた貪食能を有するクルマエビ血球細胞の新規分類方法の開発

基于膜蛋白的吞噬能力对虾血细胞分类新方法的建立

基本信息

批准号：
16J08185
负责人：
小祝敬一郎
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tokyo University of Marine Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-22 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は，血球細胞を糖鎖に基づき分類するため，レクチンの血球細胞に対する反応性をフローサイトメーターおよび蛍光顕微鏡観察により確認した. その結果，クルマエビの血球細胞には，LEL および WGA が特徴的な染色性を示した.LEL は細胞表面に強い結合性を示す一方，WGA は細胞内の顆粒に強い結合を示すことが蛍光顕微鏡下で観察された.次に，ビオチン標識された LEL およびストレプトアビジン標識マイクロビーズを用いた細胞磁気標識法により， 2 つの血球細胞亜集団の分離に成功した . これら細胞集団は形態学的特徴およびその遺伝子転写産物の蓄積パターンから，既報の無顆粒球および顆粒球の 2 種類の集団であることが示唆された.その後，MACSシステムを用いた細胞亜集団の分離後，次世代シークエンサーにより各細胞亜集団の遺伝子転写産物を網羅的に解析した．LEL強陽性血球細胞では，トランスグルタミナーゼ関連遺伝子転写産物の蓄積が多かった．LEL弱陽性血球細胞では，抗菌ペプチドおよびクロッティング関連遺伝子転写産物の蓄積が多かった．また，in vitro でビーズの貪食を行わせた血球細胞をレクチン染色に供したところ，ビーズ貪食細胞に対して WGA が 100%の陽性率を示したことから，クルマエビにおいて顆粒球が貪食作用を主に担っていることが示唆された.

今年，为了根据糖链对血细胞进行分类，我们使用流式细胞仪和荧光显微镜确认了凝集素对血细胞的反应性，结果发现虾血细胞具有特征性的LEL和WGA。荧光显微镜下发现LEL与细胞表面有较强的结合，而WGA则与细胞内颗粒有较强的结合。我们使用链霉亲和素标记的微珠，通过细胞磁性标记方法成功分离了两个血细胞亚群。这些细胞群是根据之前报道的粒细胞亚群的形态特征和基因转录物的积累模式确定的。有两种类型的细胞群：粒细胞和粒细胞。使用MACS系统分离细胞亚群后，我们使用下一代测序仪全面分析了每个细胞亚群的基因转录本。在 LEL 强阳性血细胞中，转谷氨酰胺酶相关基因转录物经常积累。抗菌肽和凝血相关基因转录物在 LEL 弱阳性血细胞中高度积累。此外，当对体外吞噬珠子的血细胞进行凝集素染色时，WGA显示珠子吞噬细胞的阳性率为100%，表明粒细胞主要负责虾的吞噬作用。